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英文名 ：EZ Trans Lentiviral Infection Kit

CAS号 ：/

保质期 ：12个月

供应商 ：李记生物Life-iLab

保存条件 ：A、B组分-20℃保存，C、D、E组分4℃保存

规格 ：5T/10T/20T

EZ Trans一站式慢病毒包装试剂盒

产品描述
和元李记EZ Trans一站式慢病毒感染试剂盒（EZ Trans Lentiviral Infection Kit）包含：慢病毒包装质粒、对照质粒、转染试剂（EZ Trans Regent）、慢病毒浓缩液、慢病毒感染增强剂等必要组份，可一站式高效完成病毒包装到感染细胞的全部过程。和元李记慢病毒包装试剂盒（Lentiviral Infection Kit）提供足量、优质的对照质粒和包装质粒，省去实验人员抽提质粒的工作可快速包装病毒感染细胞。
和元李记慢病毒载体表达系统由pLenti慢病毒载体和Lentiviral Mix质粒组成。pLenti慢载体中含有HIV基本元件5’LTR和3’LTR以及WPRE等其他辅助元件，表达框为U6-shRNA(NC)-CMV-EGFP-2A-Puro，含绿色荧光和puro真核抗性。客户可以根据不同的实验目的针对plenti载体改造用于启动子、基因功能功能研究，稳定株筛选等。Lentiviral Mix能够表达病毒包装需要的各种必需原件，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包装系统。
订购信息

产品名称	货号	规格
EZ Trans一站式慢病毒包装试剂盒	AC04L605	5T
EZ Trans一站式慢病毒包装试剂盒	AC04L610	10T
EZ Trans一站式慢病毒包装试剂盒	AC04L620	20T

产品组分

货号	规格	组分
		A:对照质粒	B:包装质粒	C:转染试剂	D:感染增强剂	E:慢病毒浓缩液
AC04L605	5T	16μL	110μL	450μL	60μL	12.5mL
AC04L610	10T	32μL	220μL	900μL	120μL	25mL
AC04L620	20T	64μL	440μL	1800μL	240μL	50mL

运输与保存
蓝冰运输。A、B组分-20℃保存，C、D、E组分4℃保存，有效期12个月。
使用方法
一、慢病毒包装及纯化浓缩（以10 cm培养皿为例，1皿为1T）

1. 细胞准备：293T细胞按照6×10⁵cells/mL的细胞密度传代到10cm培养皿中，第二天细胞长到80%-85%时准备转染。
2. 转染前换液：转染前1h将需要转染的细胞更换新鲜的DMEM，10mL/皿。
3. 转染：

1. 取1.5ml EP管记为质粒混合液（管A），加入500uL DMEM，16μL质粒DNA（可自行改造）和22μL包装质粒，振荡混匀；
2. 另取1.5mL EP管记为转染试剂混合液（管B），加入500uL DMEM，90μL 转染试剂，振荡混匀。
3. 再将管B缓慢加入到管A中，轻轻混匀，静置8min形成复合物，后将混合液均匀滴加到提前换好液的10cm培养皿中，轻轻混匀，放入培养箱中培养。

A管	DMEM	500μL
	DNA	16μL
	包装质粒	22μL
B管	DMEM	500μL
	转染试剂	90μL

1. 转染后换液：转染后6-8h，将培养皿中的培养基吸掉，弃于废液杯中，然后加入10mL 完全培养基（含有血清和抗生素）继续培养。
2. 病毒收集：转染48h后，吸取上清液于50mL 离心管中，4000rpm离心10min, 4℃，将上清液用0.45um过滤器过滤转移到新的50mL 离心管中。此时上清液中的病毒颗粒可以直接去检测滴度或者感染目的细胞，如果对病毒的滴度及纯度有较高要求，可进行后续操作。
3. 病毒浓缩：每10mL 病毒上清液加入2.5mL EZ慢病毒浓缩液（CAT:AC04L442），混匀，4℃放置2h，4000rpm离心30min，吸弃上清。
4. 检测及分装：包装好的病毒可以直接检测滴度，待用的病毒用EZ病毒保护液重悬分装冻存。

二、慢病毒感染细胞（以293T细胞为例，MOI值为1）

1. 细胞铺板：

1. 将293T细胞配成5×10⁴cells/mL细胞悬液，待铺板。
2. 将上述细胞悬液接种到6孔板，每孔铺2mL，即1×10⁵cells/well。

1. 感染慢病毒：

1. 铺好板细胞培养12-20h，准备感染。
2. 加病毒，计算方法：(细胞数×MOI值/病毒原液滴度)×10³=病毒量(μL)，加病毒量见下表。
3. 加感染增强剂：每孔加10μL 1mg/mL 感染增强剂，最终在细胞样品中感染增强剂的终浓度为5μg/mL，轻摇使增强剂分散均匀。
4. 换液：感染12-20h弃去培养基，每孔加入2mL 新鲜培养基。

病毒原液滴度（TU/mL）	MOI =1，10组（μL）
1×107	100
1×108	10
5×108	2
1×109	1
2×109	0.5

1. 观察：72h后观察细胞状态，根据情况做开展后续实验。（可选）

注意事项

1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 所有慢病毒操作均应尽量在BSL2级生物安全柜中进行，并佩戴一次性医用口罩和手套。
3. 病毒切忌反复冻融，冻融一次病毒滴度降低10%-20%左右。
4. 病毒储存6个月后，建议在使用前重新测定病毒滴度。
5. 若MOI值高于20时，建议感染增强剂使用体积为8μL/mL，提高转染效率，一些特殊细胞不能加入感染增强剂。
6. 病毒添加量与待感染细胞MOI值、病毒滴度、目的基因产物对细胞毒性有关，病毒添加量计算方法满足大多数实验需要，实验人员可在此基础上摸索最佳病毒添加量。

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