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文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：Soil Fluorescein Diacetate (FDA) Hydrolase Kit
CAS号 ：WS2230W
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：96T
本试剂盒仅供科研使用
土壤荧光素二乙酸酯（Fluorescein diacetate，FDA）水解酶试剂盒说明书
（货号：WS2230W 微板法 96 样）
一、产品简介：
土壤荧光素二乙酸酯(FDA)水解酶与土壤总碳、全氮、全磷等土壤养分指标间关系密切，与微生物活
性间的相关性比其他酶活性更显着，同时也能够很好地反映系统中有机质的转化和土壤中微生物的活
性，是土壤健康质量的微生物学指标之一。
FDA 是一种无色化合物，在介质中能被许多土壤酶所催化水解，并经脱水反应，产生酶解终产物—荧
光素，该黄色产物在 490nm 处有强吸收峰，通过检测 490nm 处的吸光值变化即可得出 FDA 水解酶活性。
二、试剂盒组分与配制
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
110mL×2 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用前加 6mL *酮充分溶解备用
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、恒温水浴锅、*酮。
四、FDA 水解酶(FDA)活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本处理：
取新鲜土样风干或 37℃烘箱风干，先粗研磨过 40 目筛备用。
【注】土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻；
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 490nm。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
土样（
g）
0.05
0.05
试剂一
1000
1000
试剂二
50
*酮
50
混匀，37℃反应 1h
*酮
150
150
混匀，12000 rpm 离心 10min，取 200μL 至 96 孔板中，
于 490nm 下读取吸光值 A，ΔA＝A 测定-A 对照。
【注】：若ΔA 的差值较大，超过 1.5，可以降低土壤取样量，或者反应产物用蒸馏水稀释之
后再检测，则稀释倍数 D 代入计算公式。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.0878x + 0.0094：x 为标准品质量(μg)，y 为ΔA。本试剂盒仅供科研使用
2
2、活性定义：每小时每克土样中产生 1μg 荧光素定义为一个酶活力单位。
FDA 活性(μg/h/g)=(ΔA -0.0094)÷0.0878÷W÷T×D=11.39×(ΔA -0.0094)÷W×D
T---反应时间，1h；
W---土壤样本实际取样量；
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
荧光素分子量---332.31。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（
5μmol/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1 mL *酮溶解，再加 1 mL
水（母液需在两天内用且-20℃保存）。
2 把母液用试剂一稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.4,0.8 , 1.2, 1.6, 2. μmol/mL。也
可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 按照 20μL 标准品+1mL 试剂一+180μL *酮的体系来操作，依据结果即可制作标准
曲线。
上海瓦兰生物科技有限公司
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