细胞凋亡

服务名称 ：细胞凋亡

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细胞凋亡（apoptosis）一般是指机体细胞在发育过程中或在某些因素作用下，通过细胞内基因及其产物的调控而发生的一种程序性细胞死亡(programmed cell death)。细胞凋亡对胚胎发育及形态发生（morphogenesis）、组织内正常细胞群的稳定、机体的防御和免疫反应、疾病或中毒时引起的细胞损伤、老化、肿瘤的发生进展起着重要作用，并具有潜在的治疗意义。

细胞凋亡途径中各事件的发生是有时序性的，即各事件按先后顺序依次发生，最终导致凋亡小体的出现，细胞随着发生凋亡。
其典型特征如下：
早期凋亡：细胞膜结构发生改变，磷脂酰丝氨酸外翻；
早中期凋亡：细胞质密度增加，线粒体膜电位消失细胞膜，通透性改变，释放细胞色素C到胞浆中；
中晚期凋亡：细胞凋亡信号转导；
晚期凋亡：DNA降解为180~200bp片段大小。
  在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，细胞发生凋亡时，细胞膜发生变化，PS 从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面。Annexin-V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。用荧光素（FITC、Alexa Fluor488等）标记的Annexin-V作为探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜即可鉴别凋亡细胞和活细胞。
坏死的细胞PS同样也会从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面，Annexin-V也能识别坏死细胞表面的PS,所以Annexin-V 无法区分坏死细胞和凋亡细胞。另外碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料，能够与细胞内DNA结合，而且它不能透过完整的细胞膜。早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整，PI染料无法自由通过细胞膜进入细胞内与DNA结合，所以PI 染料无法标记凋亡细胞和活细胞，而PI染料却能够通过坏死细胞的细胞膜与细胞内的DNA结合，坏死细胞内的PI染料被488nm激光激发后会发射红荧光，被相应通道接收。所以Annexin V和PI同时使用，就可以区分活细胞、早期凋亡细胞和坏死细胞。