产品详情
文献和实验
相关推荐
服务名称 :真核表达载体构建
提供商 :XSL
- 服务介绍
- 实验原理
T4噬菌体DNA连接酶催化DNA连接反应分为3步:首先,T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶—AMP复合 物;然后,酶—AMP复合物再结合到具有5’磷酸基和3’羟基切口的DNA上,使DNA腺苷化;最后产生一个新的磷酸二酯键,把切口封起来。
DNA重组的方法主要有粘端连接法和平端连接法,为了防止载体本身的自连,可以通过(牛小肠碱性磷酸 酶)CIP处理克服。
连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性.但是在这个温度下,粘性末端的氢键结合是不稳定的。因 此人们找到了一个折中温度,即12-16℃,连接12-16h(过夜),这样既可最大限度地发挥连接酶的活性,又 兼顾到短暂配对结构的稳定。
- 实验流程
连接反应;
电泳检测连接产物。
- 客户提供 样本DNA,基因序列,试剂盒。
- 公司提供 构建好的载体,电泳胶图,测序结果。
欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
浙江联硕生物科技有限公司
实名认证
金牌会员
入驻年限:7年