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库存 ：100
英文名 ：Erwinia amylovora
CAS号 ：/
保质期 ：1年
供应商 ：上海晅科生物科技有限公司
保存条件 ：-20℃
规格 ：50次
梨火疫病菌PCR试剂盒英文名称：Erwinia amylovora
梨火疫病(Erwinia amylovora)是梨、苹果及其它蔷薇科植物上的一种毁灭 性细菌病害。有该病的国家包括北美、南太平洋地区、欧洲西北部和中部、东 欧以及地中海地区的 40 余个国家和地区。目前用于检测梨火疫病菌的方法主 要有半选择性培养基分离鉴定、血清学检测、DNA 杂交和 PCR 技术。分子生 物学方法是精确揭示遗传关系较为稳定的方法，在植物病原细菌检测和鉴定中 应用最多也是最主要的是专化性引物 PCR 技术。本产品是根据 PCR 原理开发 检测梨火疫病菌的试剂盒。
产品特点：
1. . 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增梨火疫病菌，与其他病原没有交叉 反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
梨火疫病菌PCR试剂盒包装规格及成分：
| 编号 |
成分 |
规格 |
| 试剂一 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） |
| 试剂二 |
超纯水 | 1 mL（亮黄色） |
| 试剂三 |
梨火疫病菌PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 |
梨火疫病菌 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂五 |
使用手册 | 1 份 |
运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。
自备试剂：DNA 模板
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 梨火疫病菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
| 成分 | N+2 个 样品管 | PCR 阴性 对照 | PCR 阳性 对照 |
| PCR Magic Mix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 梨火疫病菌 PCR 引物 混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | ||
| PCR 阴性对照（水） | 18 μL | ||
| PCR 阳性对照（梨火疫病菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液） | 18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应 （35 个循环） | 95℃ | 30 sec |
| 55℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 30 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。
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