文献支持维生素B6测试盒（可见分光光度法）

维生素B6（Vitamin B6，VB6）试剂盒说明书
                                        分光光度法50管/48样


注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
维生素B6（Vitamin B6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素，在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢，对生物体具有极其重要的作用。

测定原理：
VB6与4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物，在390nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：
天平、研钵、离心机、可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂组成和配制 ：
提取液：液体35mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体1mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体12mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体18mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体18mL×1瓶，4℃避光保存。

样本处理：

1. 组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，16000rpm离心10min，取上清测定（动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟）。
2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，16000rpm离心10min，取上清测定。
3. 血清：直接测定。                

测定操作：
 

	空白管	测定管
样品（μL）		200
试剂一（μL）	200
试剂二（μL）	200	200
试剂三（μL）	300	300
试剂四（μL）	300	300
充分混匀，25℃反应20min，于1mL玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定390nm处吸光值，记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。

计算公式：
标准曲线：y = 0.3635x+0.0205，R² = 0.9986
1. 按照蛋白含量计算
VB6含量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷（V样×Cpr）
                    = 13.76×（△A - 0.0205）÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB6含量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.36359 ×V反总÷（V样×W÷V样总）
                = 13.76×（△A - 0.0205）÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB6含量（μg/10⁴ cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）
                     = 13.76×（△A - 0.0205）÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB6含量（μg/mL）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷V样
                  =13.76×（△A - 0.0205）
V反总：反应总体积，1mL；：V样：加入样本体积，0.2mL；V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g


注意事项：

1. 若测定结果中吸光值超过1，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
2. 蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 显色完成后立即进行测定。