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库存 :100
英文名 :Piscirickettsia salmonis
CAS号 :/
保质期 :1年
供应商 :上海晅科生物科技有限公司
保存条件 :-20℃
规格 :50次
鲑鱼立克次氏体PCR试剂盒英文名称:Piscirickettsia salmonis
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。为此本公司开发了简单快捷的鲑鱼立克次氏体PCR试剂盒。
产品特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增鲑鱼立克次氏体。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
鲑鱼立克次氏体PCR试剂盒包装规格及成分:
编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 mL(红盖) |
试剂二 |
超纯水 | 1 mL(亮黄色) |
试剂三 |
鲑鱼立克次氏体 PCR 引物混合液 | 100 μL(白盖) |
试剂四 |
鲑鱼立克次氏体PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL(黄盖) |
试剂五 |
使用手册 | 1 份 |
运输及保存:低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。
自备试剂:DNA 模板
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求 的样品起始量)中加 10μL 鲑鱼立克次氏体 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 | N+2 个 样品管 | PCR 阴性 对照 | PCR 阳性 对照 |
PCR Magic Mix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
鲑鱼立克次氏体PCR 引物 混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | ||
PCR 阴性对照(水) | 18 μL | ||
PCR 阳性对照(鲑鱼立克次氏体 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液) | 18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) | 95℃ | 30 sec |
55℃ | 30 sec | |
72℃ | 30 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。
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