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抗体英文名 :AU*Polyclonal Rabbit Anti-Horse IgG(H+L)
抗体经过酶标记、铁蛋白标记或通过胶体金标记获得标记抗体,是免疫电镜样品制备的一种方法,用于观察抗原抗体免疫复合物方面研究的手段。免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上,通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。抗体标记主要是用于抗原的定位分析,在某些情况下,也可以对混杂有大量其他分子的样本中的抗原进行定量检测。
辣根过氧化物酶(HRP)是一种含亚铁血红素的蛋白质,广泛分布于植物界,以在辣根中含量高而得名,分子质量约为40KDa。HRP作为酶标记抗体是通过共价键经适当的方法将酶联接在抗体上,形成酶标抗体后再通过酶对底物的特异性催化作用,生成有色不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,利用肉眼、光学显微镜或电子显微镜可对结果进行观察。
HRP由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成,该酶的活性中心含铁卟啉即辅基,在403nm波长处呈现最高吸收峰,酶蛋白部分吸收波长为275nm,HRP的纯度为二者的吸光度比值RZ[1] ,该酶与抗体标记的方法有多种,根据酶的结构可分为戊二-醛两步法和过碘-酸钠法两种方式标记抗体。
FITC异硫青酸荧光素是一种常用的标记抗体的方法。FITC一般为黄色。棕色或棕色粉末或结晶,在低温下可保存数年。在碱性条件下,FITC的碳酰胺键可与抗体蛋白上的赖氨酸氨基结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。抗体分子最多可标记15~20个FITC分子。标记的抗体仍能保持与相应抗原结合的能力,在荧光源紫外线或蓝紫光的刺激下产生黄绿色荧光,通过荧光显微镜观察或使用流细胞仪进行分析,从而定性、定位或定量抗原。
一般每个抗体可以标记3-5个生物素,标记时,生物素与抗体的比率受抗体浓度影响,对于10 mg/ml 的抗体溶液来说,生物素应超过蛋白12倍(摩尔数),对于2 mg/ml 的抗体溶液应超过20倍,
辣根过氧化物酶(HRP)是一种含亚铁血红素的蛋白质,广泛分布于植物界,以在辣根中含量高而得名,分子质量约为40KDa。HRP作为酶标记抗体是通过共价键经适当的方法将酶联接在抗体上,形成酶标抗体后再通过酶对底物的特异性催化作用,生成有色不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,利用肉眼、光学显微镜或电子显微镜可对结果进行观察。
HRP由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成,该酶的活性中心含铁卟啉即辅基,在403nm波长处呈现最高吸收峰,酶蛋白部分吸收波长为275nm,HRP的纯度为二者的吸光度比值RZ[1] ,该酶与抗体标记的方法有多种,根据酶的结构可分为戊二-醛两步法和过碘-酸钠法两种方式标记抗体。
FITC异硫青酸荧光素是一种常用的标记抗体的方法。FITC一般为黄色。棕色或棕色粉末或结晶,在低温下可保存数年。在碱性条件下,FITC的碳酰胺键可与抗体蛋白上的赖氨酸氨基结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。抗体分子最多可标记15~20个FITC分子。标记的抗体仍能保持与相应抗原结合的能力,在荧光源紫外线或蓝紫光的刺激下产生黄绿色荧光,通过荧光显微镜观察或使用流细胞仪进行分析,从而定性、定位或定量抗原。
一般每个抗体可以标记3-5个生物素,标记时,生物素与抗体的比率受抗体浓度影响,对于10 mg/ml 的抗体溶液来说,生物素应超过蛋白12倍(摩尔数),对于2 mg/ml 的抗体溶液应超过20倍,
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