SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒

库存 ：大量现货

保质期 ：2年

供应商 ：上海经科化学科技有限公司

保存条件 ：2-8℃

规格 ：50T

产品简介

本产品SDS-PAGE凝胶制备试剂盒包含凝胶制备所需的所有试剂，用户只需准备少量纯水及制胶设备（制胶底座、玻璃板、梳子等），根据说明书操作即可制得所需凝胶。本试剂盒可制备常规大小凝胶至少50块。

使用方法

1. 根据目的蛋白分子量和所选电泳缓冲液不同，选择合适浓度的SDS-PAGE下层胶，参照表格如下：

SDS-PAGE分离胶浓度	最佳分离范围（kDa） （Tris-Glycine电泳缓冲液）	最佳分离范围（kDa） （SWE快速高分辨电泳缓冲液）
6%	50-300	15-300
8%	30-130	10-250
10%	20-100	5-150
12%	10-60	3-100
15%	<40	<60

2.  根据目标蛋白分子量大小，选取分离胶的浓度，以常用规格8.3 cm×7.3 cm凝胶板（单块）为例，可参考下表配制制胶液：

分离胶浓度(%)	6%			8%			10%			12%			15%
玻璃板厚度	0.75 mm	1.0 mm	1.5 mm	0.75 mm	1.0 mm	1.5 mm	0.75 mm	1.0 mm	1.5 mm	0.75 mm	1.0 mm	1.5 mm	0.75 mm	1.0 mm	1.5 mm
所需制胶液总体积*（mL）	4.0	6.0	8.0	4.0	6.0	8.0	4.0	6.0	8.0	4.0	6.0	8.0	4.0	6.0	8.0
H2O（mL）	2.12	3.18	4.24	1.85	2.78	3.7	1.59	2.38	3.17	1.32	1.98	2.64	0.92	1.38	1.84
30% 丙希酰胺（29:1）（mL）	0.8	1.2	1.6	1.07	1.6	2.14	1.33	2.0	2.67	1.6	2.4	3.2	2.0	3.0	4.0
1.5 M Tris-HCl（pH 8.8）（mL）	1.0	1.5	2.0	1.0	1.5	2.0	1.0	1.5	2.0	1.0	1.5	2.0	1.0	1.5	2.0
10% SDS（μL）	40	60	80	40	60	80	40	60	80	40	60	80	40	60	80
10% AP（过流酸铵）μL	40	60	80	40	60	80	40	60	80	40	60	80	40	60	80
TEMED（μL）	2.0	3.0	4.0	2.0	3.0	4.0	2.0	3.0	4.0	2.0	3.0	4.0	2.0	3.0	4.0

^*制胶液总体积不包含TEMED的体积。

 

3. 浓缩胶配制可参考下表：

浓缩胶浓度(%)	5%
H2O（mL）	1.93	2.95	3.86	5.79
30% 丙希酰胺（29:1）（mL）	0.5	0.75	1.0	1.5
1.0M Tris-HCl（pH 6.8）（mL）	0.5	0.75	1.0	1.5
10% SDS（μL）	40	60	80	120
10% AP（过流酸铵）（μL）	30	45	60	90
TEMED（μL）	4	6	8	12
总体积*（mL）	3	4.5	6.0	9.0

^*总体积不包含TEMED的体积。

 

4. 推荐电泳条件：

a. 使用SWE快速高分辨电泳缓冲液进行电泳：200-250 V恒压，25-35 min可完成电泳；

b. 使用Tris-Glycine电泳缓冲液进行电泳：上层胶设置电压90 V，电泳约30 min（marker进入分离胶）；下层胶调整电压为150-180 V，约60-90 min(可根据实际情况调整)。

储存与运输

冰袋运输；4℃避光保存，有效期12个月。

注意事项

1. 所有试剂使用前需要提前复温至室温后方可使用。

2. AP（过流酸铵）用纯水配制成10%浓度，即每支180 mg AP（过流酸铵）管中加入1800 μL纯水溶解。配制成溶液的AP建议分装成小份后-20℃保存，有效期3个月；如放4℃保存，有效期1周。

3. 小于10 kDa的蛋白分离建议使用Tricine胶，丙希酰胺凝胶可能不足以分离。

4. 温度对于胶的凝固时间会有影响，一般温度越低，凝固时间越长；温度越高凝胶越快。

5. 凝胶需要充分的凝固时间，建议胶制好充分静置确保凝胶彻底。

6. 当温度较低时，10%SDS溶液有结晶析出，于37℃复温融化后可继续使用。

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。