产品详情
文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：Glutathione peroxidase (GPX) kit
CAS号 ：WS4020W
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：48T/96T
本试剂盒仅供科研使用
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒说明书
（货号：WS4020W 微板法 96 样）
一、产品简介：
谷胱甘肽过氧化物酶（GPx，EC 1.11.1.9）代表一种具有过氧化物酶活性的酶家族，在保护生物免受氧
化损伤中起重要作用。以往以过氧化氢为底物进行检测，则会受到分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的
干扰，本试剂盒提供的有机过氧化物试剂(Cum-OOH)不会被过氧化氢酶分解，因而可以特异地检测出谷胱
甘肽过氧化物酶的活力。 因此本试剂盒可以定量检测总谷胱甘肽过氧化物酶。
GSH 和 DTNB 反应产生黄色物质，后者在 412nm 下有最大吸收峰，而 GSH-Px 催化有机过氧化物试剂
(Cum-OOH)氧化 GSH，使 GSH 量减少，GSH 量减少越多，反应混合液黄色越浅，则 GSH-Px 活性越大；
反之，黄色越深，GSH-Px 活性越低。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
8mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
4mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
80mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
10 mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
2mL×1 瓶
4℃保存 若冷藏后呈固体，可 25℃水浴 5min 融化即可。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织（水分充足样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，在 4ºC
或冰浴匀浆(或使用各类常见电动匀浆器)。4ºC 约 12,000rpm 离心 10min，取上清待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞
加入 1mL 提取液，在 4ºC 或冰浴进行匀浆(或使用各类常见电动匀浆器)。4ºC 约
12,000rpm 离心 10min，取上清待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量(104)：提取液(mL)为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 412 nm（若无此波长，可在 420nm 下检测）。
② 用排枪操作，以减小各孔间因加入试剂时间先后导致的误差。
③ 试剂一到五在 25℃水浴中预热 30min，在 EP 管中依次加入：
试剂名称（µL）
测定管
空白管
试剂一
80
80
样本
80
蒸馏水
80
试剂二
40
40本试剂盒仅供科研使用
2
25℃条件下反应 5min(严格控制时间）
试剂三
800
800
若有沉淀，需 12000rpm 室温离心 10min,上清液待测。
④显色反应：在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（µL）
测定管
空白管
上述步骤的上清液
80
80
试剂四
100
100
试剂五
20
20
反应 2min 后，于 412nm 波长读取吸光值 A，△A=A 空白管-A 测定管。
【注】：1. 最后一步的显色反应，务必在 5min 之内读取吸光值。若ΔA 在零附近，可增大加样量
V1（如增至 160μL，则试剂三相应减少，总体积不变），或增加第③步反应时间 T（如由 5min
增至 15min 或更长），或增加样本质量 W。则改变后的 V1 和 T 和 W 需要代入公式重新计算。
五、结果计算：
1.标准曲线：y = 3.6568x - 0.0103。x 是 GSH 摩尔浓度：μmol/mL，y 为吸光值ΔA 。
2. 按蛋白浓度计算：
酶活定义：在 25ºC 反应条件下，每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol GSH 为 1 个酶活单位。
GPx 酶活(nmol/min/mg prot)=[(△A+0.0103)÷3.6568×103×V2]÷(Cpr×V1)÷T×D
= 683.7×(△A+0.0103)÷Cpr×D
3. 按样本质量计算：
酶活定义：在 25ºC 反应条件下，每克样本每分钟氧化 1nmol GSH 为 1 个酶活单位。
GPx 酶活(nmol/min/g 鲜重)=[(△A+0.0103)÷3.6568×103×V2]÷(W×V1÷V)÷T×D
= 683.7×(△A+0.0103)÷W×D
4. 按细胞数量计算：
酶活定义：在 25ºC 反应条件下，每 104个细胞每分钟氧化 1nmol GSH 为 1 个酶活单位。
GPx 酶活(nmol/min/104 cell)=[(△A+0.0103)÷3.6568×103×V2]÷(细胞数量×V1÷V)÷T×D
=683.7×(△A+0.0103)÷细胞数量×D
5. 按液体体积计算：
活性单位定义：在 25ºC 反应条件下，每毫升液体每分钟氧化 1nmol GSH 为 1 个酶活单位。
GPx 酶活(nmol /min/mL)=[(△A+0.0103)÷3.6568×103×V2]÷V1÷T×D=683.7×(△A+0.0103)×D
V---提取液体积，1 mL；
V1---加入反应体系中上清液体积，80μL =0.08 mL；
V2---反应阶段的反应总体积，1000µL=1mL；
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
W---样本质量，g；
GSH 分子量---307.3； T---反应时间，5min；
Cpr---上清液蛋白浓度（mg/mL）；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1
制备标准品母液（0.25µmol/mL）：临用前甩几下使粉体落入底部，再加入 1.6mL 蒸馏水溶解，
并用蒸馏水稀释 10 倍的标准品母液（母液需在两天内用且-20℃保存）。
2
把母液用蒸馏水稀释成六个浓度：0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25 µmol/mL。
3
显色反应阶段，在 96 孔板中依次加入：80μL 标准品+100μL 试剂四+20μL 试剂五，反应 2min 后，
于 412nm 波长读取吸光值 A，依据结果即可制作标准曲线。
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