康为世纪CW2333S RIPA裂解液（强）RIPA Lysis Buffer（Strong）100ml

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供应商 ：北京诺博莱德科技有限公司

康为世纪CW2333S RIPA裂解液（强）RIPA Lysis Buffer（Strong）100ml

康为世纪生物科技股份有限公司是一家立足于生命科学领域，有自主知识产权的国家高新技术企业，主要从事高附加值、高技术含量的生物试剂的研发与生产，为生命科学研究、基因检测和体外诊断用户提供创新型生物产品和服务。公司曾先后被评为国家高新技术企业、江苏省科技型中小企业、江苏省瞪羚企业、江苏省民营科技企业。公司建立了专业化、集约化、能够形成自主知识产权的技术创新体系和开放式的合作创新平台，构建成了公司完整的研发创新体系。
产品线主要包括分子诊断原料酶、核酸采集与保护剂、核酸提取试剂盒、分子诊断检测试剂等，打破了中国生物研究与产业对进口试剂的依赖。

我们北京诺博莱德科技有限公司作为康为世纪公司的特约经销商为客户提供，保证原装正品，货期稳定，折扣好的服务标准。

康为世纪CW2333S RIPA裂解液（强）RIPA Lysis Buffer（Strong）100ml，产品简介：
产品品牌：全式金
产品货号：CW2333S
产品名称：RIPA裂解液（强）
英文名称：RIPA Lysis Buffer（Strong）
产品规格：100ml

产品说明：
RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可以分为强、中、弱三类，具体特点和差异请参考附表2，可根据实验需求选择相应产品。RIPA裂解液（强）可以有效提取细胞核、细胞膜和胞浆蛋白，提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。
　　
RIPA裂解液（强）的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1%Trinto
X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等。

注意事项

1. 为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。

 

1. 使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，以测定蛋白浓度。产品可单独向本公司订购，如：CW0014 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂，不能用Bradford法进行蛋白定量。

 

1. 建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购，如：CW2200 蛋白酶抑制剂混合物，CW2383 磷酸酶抑制剂混合物。

 

1. 若需获得更高浓度的蛋白，应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。

 

1. 对于培养瓶中的贴壁细胞，推荐先使用常规方法消化细胞，再参考悬浮细胞蛋白提取步骤操作。

 

1. 对于离心获得的细胞，若不确定细胞体积，可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用量。如5×10⁶个Hela细胞约需加入500 μl RIPA裂解液，以此类推。

操作步骤
 I 细胞样品
· 贴壁细胞蛋白抽提
1．小心倾去贴壁细胞的培养液。
2．可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请先使用预冷的 PBS漂洗细胞。
3．加入适量RIPA Lysis Buffer（Strong）（使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂），试剂使用量请参考附表1，在冰上用枪头吹打贴壁细胞。

表 1 贴壁细胞 RIPA 裂解液使用量推荐表
细胞培养板类型或培养面积	RIPA 裂解液使用量
100 mm	500-1,000 µl
60 mm	250-500 µl
6 孔培养板	200-400 µl /孔
24 孔培养板	100-200 µl /孔
96 孔培养板	50-100 µl /孔

4．将裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
5．14,000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。


· 悬浮细胞蛋白提取
1．悬浮细胞，2,500×g离心5分钟，弃去上清。
2．可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请使用PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5分钟，弃去上清。
3．加入适量RIPA Lysis Buffer（Strong）（使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂）每5×10⁶细胞加入约200-500 µl RIPA Lysis Buffer（Strong），吹打均匀。
4．冰上放置20分钟，使细胞充分裂解。
5．14,000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
 
II 组织样品
1．取适当的RIPA Lysis Buffer（Strong），在使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂。
2．称量实验组织的重量，按照1:10（g/ml）的比例加入RIPA Lysis Buffer（Strong）
后将组织剪成细小碎片，用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3．冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
4．14,000×g 离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为基因组。
 

表2 蛋白裂解液性能、参数比较
目录号	CW2333	CW2334	CW2335	CW2337
产品名称	RIPA 裂解液（强）	RIPA 裂解液（中）	RIPA 裂解液（弱）	SDS 裂解液
有效裂解成分	1%Triton X-100， 1% sodium deoxycholate， 0.1% SDS	1% NP-40， 0.5% sodium deoxycholate， 0.1% SDS	1% NP-40， 0.25% sodium deoxycholate	1%SDS
裂解强度	强	中	温和	强
膜蛋白提取	很好	较好	一般	很好
胞浆蛋白提取	很好	很好	很好	很好
核蛋白提取	很好	较好	较好	很好
主要用途	WB，IP	WB，IP	WB，IP，CO-IP	WB，CHIP