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文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：Non protein thiol (NPTs) kit
CAS号 ：WS1210W
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：48T
本试剂盒仅供科研使用
非蛋白巯基含量测定试剂盒说明书
（货号：WS1210W 微板法 48 样）
一、产品简介：
巯基化合物在生物体内具有重要的解毒功能，可与烯烃类、氢氢酸、醛类、环氧化物、
砷和很多重金属产生反应。因此，在动植物受到某些化学毒物干扰后，巯基含量有可能降
低，其中非蛋白巯基成分下降得更快。
本试剂盒采用 Ellman 方法，由 DTNB 与样品中的巯基进行反应，在 412nm 处有特征吸
收峰，可通过该吸光值计算出非蛋白巯基的含量。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 13mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 1mL×1 支
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、低温离心机、可调式移液器、甲醇。
四、非蛋白巯基（NPT）的测定：
1、样本制备
① 组织样本
称取约 0.1g 组织，加入 0.4mL 提取液，进行冰浴匀浆。然后加入 0.8mL 甲醇，室温
震荡 10min（防止液体蒸发丢失，可加甲醇补齐），12000rpm，4℃离心 10min，取上清
置冰上待测。
【注】：①根据实验室条件，可先液氮研磨，再加提取液，进行冰浴匀浆。
②根据研究需求，可按组织质量（
g）：提取液体积（mL）为 1:10 的比例进行提取。
② 液体样本
取 0.1ml 液体，加入 0.4mL 提取液，进行冰浴匀浆。然后加入 0.8mL 甲醇，室温震
荡 10min（防止液体蒸发丢失，可加甲醇补齐至 1.3mL），12000rpm，4℃离心 10min，
取上清液置冰上待测。
2、上机检测
① 酶标仪预热 30min，设置温度在 25℃，设定波长为 412nm。
② 所有试剂在使用前均须在室温或 25℃水浴锅中温育 10min。
③ 在 96 孔酶标板中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样品
30
30
蒸馏水
试剂一
120
140
试剂二
20
混匀，25℃静置 2min，于 96 孔板，测定 412nm 吸光
值，ΔA=A 测定-A 对照（每个样本做一个自身对照）。
【注】：若加入试剂二有白色浑浊产生，立即混匀样本即可恢复澄清。本试剂盒仅供科研使用
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五、结果计算：
1、标准曲线方程：y=1.0702x + 0.0012，x 为标准品摩尔质量(μmoL/mL)；y 为ΔA。
2、按样本质量计算：
非蛋白质巯基含量（μmoL/g 鲜重）=[(ΔA-0.0012)÷1.0702×V1]÷(W×V1÷V)
=1.12×(ΔA-0.0012)÷W
3、按液体体积计算：
非蛋白质基含量（μmol/mL）=[(ΔA-0.0012)÷1.0702×V1]÷［(0.1×V1÷(V+0.1)］
=12.14×(ΔA-0.0012)
V---上清液总体积，1.2mL；
V1---加入样本体积，0.03 mL；
W---样本质量，g；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1μmol/mL）：标准品溶解在 2mL 蒸馏水中。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.μmoL/mL。也可根
据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据加样表的测定管操作，根据结果即可制作标准曲线。
上海瓦兰生物科技有限公司
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