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库存 :33
英文名 :Recombinant Human HSD17B11
保质期 :说明书
供应商 :上海抚生
保存条件 :-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
规格 :50μg/200μg/1mg
公司产品仅供科研实验,不得用于临床诊断!商品详情:
产品名称 | Recombinant Human HSD17B11 |
货号 | A-01K101953 |
规格 | 50μg, 200μg, 1mg |
种属 | Human |
宿主 | E.Coli |
表达区间 | 28-300 |
分子量 | 50.5 kDa |
标签 | N-terminal His-IF2DI Tag |
纯度 | Greater than 95% as determined by SDS-PAGE |
应用 | Western Blot, ELISA |
性状 | Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in PBS with 5% trehalose, pH7.4 |
溶解方法 | Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex |
存储 | -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution |
别名 | 17 beta HSD 11, 17 beta HSD XI, 17 BETA HSD11, 17 BETA HSDXI, 17 beta hydroxysteroid dehydrogenase 11, 17 beta hydroxysteroid dehydrogenase type XI, 17 beta hydroxysteroid dehydrogenase XI, 17-beta-HSD 11, 17-beta-HSD XI, 17-beta-hydroxysteroid dehydrogenase 11 |
1. 分装量的多少取决于每次试验的使用量。分装量不少于 10μl;分装量越少,由于蒸发和吸附于管内壁而引起的损失会越大。
2. 避免使用无霜冰箱来保存重组蛋白。
3. 解冻后的分装重组蛋白应保存于 4℃,一般可以保存1-2周。
4. 稀释至工作浓度的重组蛋白最好不要在 4℃保存超过一天时间。
5. 冷冻保存的蛋白溶液,在使用之前应室温解冻,确认充分溶解,没有结块后使用。
6. 取用溶液时避免反复多次吹打蛋白溶液,以免引起不必要的活性损失。
操作步骤:
(一)获得目的基因
1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。
2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。
3、人工合成法:依照检索到的目的基因序列,设计合成相互重叠的单链寡核苷酸,再通过重叠延伸PCR法拼接出全长,这种方法无需模板,是目前常用的获取基因的手段之一。
(二)构建重组表达载体
1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。
2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
(三)获得含重组表达质粒的表达菌种
1、将连接产物转化大肠杆菌,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。
2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。
3、以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。
(四)诱导表达
1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。
2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中,37℃震荡培养至OD600 ≌0.4-1.0(最好0.6,大约需3hr)。
3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。
4、分别取菌体1ml,离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀,70℃10min。
5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。
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