产品详情
文献和实验
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库存 ：大量
英文名 ：Hydrogen Peroxide Assay Kit
CAS号 ：WS2110F
保质期 ：3个月
供应商 ：上海瓦兰生物
保存条件 ：4℃
规格 ：48T
本试剂盒仅供科研使用
过氧化氢含量（H2O2）试剂盒说明书（货号：WS2110F 分光法 48 样）
一、产品简介：
过氧化氢（H2O2)是重要的活性氧之一，不仅具有损伤生物大分子、产生细胞毒害的
能力， 而且还可作为信号分子，在生物和非生物胁迫应激、细胞程序性死亡以及生长
发育调控过程中起重要作用。它与钛盐反应生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被浓
硫酸溶解后，在波长 415nm 波长下有最大吸收峰。其颜色深浅与 H2O2浓度成线性关系。
二、试剂盒的组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
粉剂×1 瓶
4℃保存
临用前加入 4mL 水，涡旋振荡充分
溶解，若有沉淀，可静置 10min（或
更长时间）或转移至 2mLEP 管中
5000rpm 室温离心 5min，取上清液
用于检测。
试剂二
液体 5mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 35mL×1 瓶
4℃保存
标准品
液体×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、 丙tong、
研钵和冰。
四、过氧化氢（
H2O2）的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 预冷bing酮，进行冰浴匀浆，
转移至 EP 管中，用丙tong定容至 1mL，12000rpm, 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g):预冷丙tong(mL)为 1:5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
预冷丙tong，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
用丙tong定容至 1mL，12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量(104):预冷丙tong(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 415nm，蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
空白管（只做一次）
样本
500
丙tong
500本试剂盒仅供科研使用
2
试剂一
50
50
试剂二
100
100
充分混匀，12000rpm，25℃离心 10min，弃上清，留沉淀
试剂三
700
700
加入试剂三溶解沉淀后混匀（若有沉淀产生，12000rpm离心2分钟即可）。
转移全部上清液转移至 1mL 玻璃比色皿中，
于 415nm 处读取吸光值 A。ΔA＝A 测定-A 空白。
【注】：1.色素含量高的样本在加入试剂二并离心后，若上清液出现悬浮黑色物质，此时须将离心得到的沉
淀，再用 500μL 预冷丙tong混匀并离心（重复 2 次），此时得到的沉淀再加入 700μL 试剂三测定。
2. ΔA 线性范围为 0.03-1.0，若ΔA 超过 1.0 则需用丙tong稀释，计算公式乘以相应稀释倍数 D。
若ΔA 值较低可增加样本取样质量 W(如增加至 0.2g)或增加样本加样体积 V1(如由 500μL 增至
700μL，其他试剂不变)，则改变后的 W 和 V1 代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.9491x + 0.0078：x 为标准品摩尔质量（
μmol），y 为ΔA。
2、按照样本质量计算：
H2O2含量(μmol/g 鲜重)=[(ΔA-0.0078) ÷0.9491]÷(W×V1÷V)×D=2.1×(ΔA-0.0078)÷W×D
3、按细胞数量计算：
H2O2含量(nmoL/104 cell)=[(ΔA-0.0078) ÷0.9491]÷(500×V1÷V)×103×D
=4.2×(△A+0.0329)×D
4、按液体体积计算：
H2O2含量(μmol/mL)=[(ΔA-0.0078) ÷0.9491] ÷V1×D=2.1×(ΔA-0.0078)×D
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入反应体系中样本体积，0.5mL；
W---样本质量，g；
D---稀释倍数，未稀释即为 1。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（20 μmol/mL）：标准品溶解在 4.99mL 丙tong中，充分混匀。
2 把母液用丙tong稀释成以下浓度梯度的标准品：0，0.4，0.8，1.2，1.6，2 μmol/mL。
也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
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