荧光探针原位杂交（FISH）实验价格

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荧光探针原位杂交（FISH）实验

荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization，FISH)实验通过偶练荧光基团的核酸探针，根据碱基互补配对原则，使荧光探针与组织或细胞内的目标DNA/RNA杂交，最后荧光显微镜检测，可直接观察到组织或细胞上一种或多种DNA/RNA的表达与分布。
FISH为研究人员提供了一种新的用于可视化或绘制单个细胞中的遗传物质(包括特定基因或基因的一部分)的方法，是了解各种染色体异常和其他基因突变的重要工具。FISH操作灵活、安全、检测结果准确，能够对各种种属的样本(如植物组织、动物组织等)进行检测，特异性较高，是一种非常通用的程序。
其中，检测的RNA类型包括mRNA、IncRNA、circRNA等等。

【常见应用范围】

观察DNA/RNA的组织分布或胞内分布情况；
观察各种RNA的相对含量；
研究DNA/RNA与蛋白的相互作用

【实验步骤】

细胞爬片固定：细胞爬片置于4%多聚甲*（DEPC）固定 20 min，使用 PBS（PH7.4）清洗，摇床晃动5min，更换新的PBS。
消化：根据不同组织/细胞的特性，滴加蛋白酶K（20ug/ml）消化10~20min，纯水冲洗后再用PBS清洗3次，每次5 min。
预杂交：滴加预杂交液，37°C恒温箱中放置1 h。
杂交：吸去预杂交液，滴加杂交液（含目的基因探针，浓度0.5 µg/ml）， 45°C度杂交过夜。
杂交后洗涤：洗去杂交液，使用2×SSC， 37°C洗10 min；再用1×SSC，37°C洗5 min，重复一次；再用0.5×SSC，37°C洗10 min。若非特异杂交体较多，可以增加甲酰胺洗涤。
再杂交：吸去预杂交液，滴加杂交液（含U6探针，浓度0.5 µg/ml）， 45°C度杂交过夜。
杂交后洗涤：洗去杂交液，使用2×SSC， 37°C洗10 min；再用1×SSC，37°C洗5 min，重复一次；再用0.5×SSC，37°C洗10 min。
DAPI复染核：向玻片上滴加DAPI染液，避光孵育5~10 min，清洗后滴加抗荧光淬灭封片剂，进行封片。
镜检拍照：将玻片置于荧光显微镜下观察并采集图像。

【试验周期】

2周

【交付内容】

实验中的所有原始数据；
完整的实验报告，包含试剂、仪器和方法步骤；
实验结果的初步分析；

【样本要求】

a.样品类型∶细胞,切片，固定组织，包埋组织，探针。
b.样品运输∶常温运输。

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