文献支持过氧化物酶(POD)试剂盒,微板法

库存 ：大量

英文名 ：Peroxidase assay kit

保质期 ：3个月

供应商 ：瓦兰生物

保存条件 ：4℃

规格 ：96T/196T

过氧化物酶(Peroxidase，POD)试剂盒
（货号:WS7010W 微板法 96 样）
一、产品简介：
过氧化物酶（POD，EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是
普遍存在的一种重要的氧化还原酶，其活性高低与抗性密切相关。在过氧化物酶催化下，
H2O2 氧化愈创木酚生成红棕色产物，该产物在 470nm 处有最大光吸收，故可通过测 470nm
下吸光值变化测定过氧化物酶活性。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
提取液
液体 110mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 5mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 1mL×1 支
4℃保存
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、过氧化物酶（POD）的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，进行
冰浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 470nm。
② 测定前将试剂一、二和三解冻至室温（25℃）。
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（µL）
测定管
样本
10
试剂一
40
试剂二
140
试剂三
10
混匀，立即在 470nm 处读取吸光值 A1，
1 分钟后读取 A2，△A=A2-A1。
【注】：1. 该反应很迅速，加完试剂三即启动反应，所以试剂三加完需立即检测，若 A1 值大于 0.6 或 A2
值大于 1.5 或ΔA 大于 1，可降低样本量 V1（如减至 5µL，则试剂二相应增加），则改变后的 V1
本试剂盒仅供科研使用
2
代入公式重新计算。
2. 若ΔA 小于 0.005，可增加样本量 V1（如减至 20µL，则试剂二相应减少），或可延长反应时间 T
（如延长到 5min 后读取 A2），则改变后的 V1 和 T 需代入公式重新计算。
3. 若上升趋势不稳定，可全部加完稳定几分钟后再读取 A1，选取一段线性增长范围读取 A2。
4. 若检测体系不变，可按照样本检测数量，预先把试剂一和二和三按照 40:140:10 比例配成所需体
积的混合液，在加样表中直接加一枪 190µL 混合液即可。
五、结果计算：
1、按样本鲜重计算：
酶活定义:每克组织每分钟在反应体系中使 470nm 处吸光值增加 1 为一个酶活单位 U。
POD(△OD470 /min/g 鲜重)=ΔA÷(W× V1÷V)÷1÷T =100×ΔA÷W
2、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟在反应体系中使 470nm 处吸光值增加 1 为一个酶活单位 U。
POD(△OD470 /min/mg prot) =ΔA÷(V1×Cpr)÷1÷T=100×ΔA÷Cpr
3、按细胞数量计算：
酶活定义:每 104 个细胞每分钟在反应体系中使 470nm 处吸光值 1 为一个酶活单位 U。
POD(△OD470 /min/104cell)=ΔA÷(500×V1÷V)÷1÷T=0.2×ΔA
4、按液体体积计算：
酶活定义:每毫升液体每分钟在反应体系中使 470nm 处吸光值增加 1 为一个酶活单位 U。
POD(△OD470 /min/mL)=ΔA÷V1÷1÷T =100×ΔA
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.01mL；
T---反应时间，1 min；
W---样本质量；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。