2×SYBR Green qPCR试剂（预混ROX1型）价格

库存：999

保质期：12月

保存条件：-20°

规格：500 Rxns×20μL

★ 产品名称：2×SYBR Green qPCR 试剂（预混 ROX1 型）
★ 产品用途：适用于实时荧光定量 PCR（qPCR）的反应试剂，适用需要 high ROX校准的仪器，如ABI 7300，StepOne Plus 等。
★ 产品描述：
本试剂盒采用具有超强扩增能力和抗干扰能力的热启动 DNA 聚合酶，结合其高度优化的缓冲液体系和染料系统，使之具备更强的扩增效率、抗干扰能力，更高的灵敏度和特异性。在相同的情况下具有起峰更早、得到的荧光信号更强、Ct 值更小及熔解曲线特异性更高等特点。此外，为了进一步简化操作，本试剂盒的 2×SYBR Green qPCR Master Mix 预混了 ROX1 染料（high ROX），从而只需要将模板 cDNA、引物以及 ddH₂O 添加进去，即可进行 qPCR 反应。

★ 产品组分：

组分	规格
2×SYBR Green qPCR Master Mix(ROX1)*	5 mL

*包含热启动DNA聚合酶, dNTPs, Mg2+, buffer, 和 SYBR Green I染料，且预混了高浓度ROX(ROX1)用于校正不同孔之间的荧光信号误差。

★ 产品优势：
● 专注于外泌体提取和配套试剂盒研发；
● 性价比高，为您的研究开展节省成本；
● 数百篇参考文献让您放心使用无忧购；

★ 质控数据

★ 产品使用：
1、使用前，将2×SYBR Green qPCR Master Mix(ROX1)试剂从-20℃冰箱中取出，室温放置5 ~ 10分钟或用手紧握试剂管使之充分融化，上下颠倒5 ~ 10次充分混匀（非常重要），然后使用离心机短暂离心至管底，放在冰上备用。
2、逆转录反应得到的cDNA建议稀释并充分混匀后再作为模板使用，这样可以提高实验的重复性。通常建议稀释5 ~ 10倍后再使用（具体的稀释倍数根据基因表达丰度来确定）。在 20 μL的qPCR反应体系中：如果模板cDNA 稀释5倍，建议使用2 μL的cDNA（1 ~ 4 μ L）；如果模板cDNA稀释10倍，建议使用4 μ L的cDNA（2 ~ 8 μL）；
如果模板cDNA稀释 20倍，建议使用9.2 μL的cDNA；如果模板 cDNA不稀释，建议使用0.4 μL的cDNA（0.2 ~ 0.8 μL）。假定模板cDNA在使用前已经用灭过菌的 ddH2O稀释了5倍（20 μL cDNA加80 μL ddH2O稀释至100 μL），按照如下表格进行 qPCR反应体系的配制：

3、 qPCR加样体系的配制：为了使加样误差降低到最低，一般建议将cDNA和ddH2O配制成预混液，2×SYBR Green qPCR Master Mix 和引物对配制成预混液，分别混匀后再依次加入到每个反应孔中（例如，对于20 μL的 qPCR反应体系：每个反应孔中，cDNA和 ddH2O的预混液加9.2 μL，2×SYBR Green qPCR Master Mix和引物对的预混液加10.8 μL）；或者根据个人熟练掌握的加样方式进行加样。
4、加样完成后，盖上封板膜并封紧，然后用离心机1000 rpm离心1分钟，将液体离心至 qPCR孔板底部。
5、 qPCR反应程序如下：

上述反应程序设置好后，按照仪器默认的程序添加熔解曲线。
注意： *1：95℃反应 5 分钟的目的是活化热启动酶，该步骤为必须步骤，因此不能省略； *2：在退火&延伸这一步骤需要进行荧光信号的采集。下方表格提供了一种代表性的熔解曲线程序供参考：

★ 关于 qPCR 反应是否良好的判断：
1、如果扩增曲线呈典型的S型曲线，荧光背景信号阶段、荧光信号指数扩增阶段及平台期均完整可见，熔解曲线单峰，内参Ct值在合理范围内（通常可在13 ~ 22之间，典型的内参 Ct值在15 ~ 20之间），则可认为该反应正常；
2、同一个模板和引物的重复孔数据Ct值相差 0.5以内；
3、同时满足以上两个条件的可以认为数据可用。

★ qPCR 引物的设计：
1、通过Google Scholar查询文献当中的引物，通常中等及以上水平期刊中的qPCR引物绝大多数可以直接使用；
2、 NCBI数据库的Blast数据库中的Primer Blast提供了针对序列或者Gene ID的qPCR 引物设计方案，每个基因建议设计2对引物进行合成、验证；
3、 Primer Bank数据库中有部分已经验证过的引物可作为参考或者直接合成使用。

★ 常见的注意事项、操作要点及优化方法：
1、实验开始前首先验证引物是否适用，标准与上述标准类似，主要观察扩增曲线与熔解曲线；
2、引物验证好用后应分装几份并放在-20℃保存，以防止污染或降解；
3、 RNA及cDNA的质量均对qPCR的结果具有很大的影响，因此应尽量保证RNA不降解。 RNA提取后应尽快进行逆转录，且避免反复冻融。如果预计使用量较大，则可以一次多逆转录几管cDNA。如果不立即使用cDNA，则建议保存在-80℃冰箱。