镀银染色

提供商 ：星森林（浙江）生物医学技术有限公司

服务名称 ：镀银染色

镀银染色指把固定后 的组织或切片浸于银溶液中，再用还原剂处 理，使银颗粒沉着于轴索的轴浆中，使之呈 现深棕色或黑 色，是神经元和神经纤维的主 要染色法。

镀银后可在神经元胞浆内看到许多交错成网的细丝，并伸入树突及轴突之中，这在HE染色中是看不到的。某些疾病时，神 经元纤维集结.可用镀银染色清晰地显示。
 镀银法染色方法

1. 清洗玻片 选择光滑无裂痕的玻片，最好选用新的。为了避免玻片相互重叠，应将玻片插在专用金属架上，然后将玻片 置洗衣粉过滤液中（洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒），煮沸20min。取出稍冷后用自来水冲洗、晾干，再放入浓 洗液中浸泡5—6天，使用前取出玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。将水沥干后，放入95%乙醇中脱水。
2. 菌液的制备及制片：菌龄较老的细菌容易失落鞭毛，所以在染色前应将待染细菌在新配制的半固体牛肉膏蛋白胨培养 基斜面上（培养基表面湿润，斜面基部含有冷凝水）。用消过毒的盖玻片切取培养基边缘的小块琼脂放进试管中，注意要轻 放并轻轻摇动，将该试管放在37℃恒温箱中静置10min（放置时间不宜太长，否则鞭毛会脱落），让幼龄菌的鞭毛松展开。 然后，吸取少量菌液滴在洁净玻片的一端，立即将玻片倾斜，使菌液缓慢地流向另一端，用吸水纸吸去多余的菌液。涂片放 空气中自然干燥。要注意的是菌液的含菌数量一定要少!

干燥后的处理

1. 干燥后用稀盐酸或稀氢氧花钠滴,并立即倾斜玻片,使酸(碱)液流下,并自然干燥.
2. 用冲稀的头发顶型剂滴加,处理一到三分钟(具体的要实验才能知道),并自然干燥. 用于鞭毛染色的菌体是用半固体培养基才用支点法培养的。方法是将0.3-0.4%的琼脂肉膏培养基熔化后倒入无菌平皿中，在 培养皿中间放三块成分减半（但是NaCl不减半,琼脂为正常百分比）的，恒温培养12-24h后，取扩散菌落的边缘制作涂片。
3. 染色 ①滴加A液，染4—6min。 ②用蒸馏水充分洗净A液。 ③用B液冲去残水，再加B液于玻片上，在酒精灯火焰上加热至冒气，约维持0.5—1min（加热时应随时补充蒸发掉的染料， 不可使玻片出现干涸区）。 ④用蒸馏水洗，自然干燥。

（4）镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查。 结果：菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。
注意事项：

1. 要选好菌种。一般用周生鞭毛菌（如普通变形杆菌Proteus vulgaris）较好，这类菌的鞭毛多而长易于观察。
2. 要注意培养条件和培养时间： ①用点接法在新配制的牛肉膏蛋白胨半固体平板上接种。一般一个平板点接3～4处。经比较用半固体培养基培养出来的菌体 活动度大，鞭毛长且多，易于染色，这可能与半固体培养基更适于菌体运动、鞭毛生长较好有关。用点接种法在平板上接种 更易于挑取边缘幼龄的菌体。 ②培养时间要严格掌握，一般培养9～12h较好，菌龄超过15h，鞭毛染色效果较差，这可能与老龄菌体活动度降低、鞭毛易 脱落有关。冰箱长期保存的菌种不宜直接用于鞭毛染色，需用新制备的斜面连续转接2～3次后再染色。
3. 所用玻片的准备：

①用过的旧载片要选择光滑无划痕的，放入已加入洗衣粉的蒸馏水中煮沸（如能预先过滤去渣更好），煮毕冷却后，清水洗 净，放入浓洗液中浸泡24h，取出用清水冲洗残酸，最后用蒸馏水洗净，沥干水并放于95％乙醇中脱水，取出后烧去酒精， 即可使用。
②新的载片虽没有油污、划痕，但含游离碱较多，所以要用2％盐酸浸泡几小时，用自来水冲洗干净，然后再用蒸馏水洗 净，沥干后再用效果较好。

1. 染色液一定要新鲜，特别是硝酸银染色法中更是如此，A染液和B染液最好都现用现配，A液一般不能放置。
2. 染色过程中的细节也应充分注意：

①取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。
②取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可，不要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开；将载片稍倾斜，使菌 液散开即可，否则鞭毛易脱落，造成染色失败。
③鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用热风吹干，不能热固定，这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落，影响观察。
④A染液染3～5min，其后用蒸馏水（自来水效果差）冲洗时一定要充分，否则加B染液后，背景很脏，鞭毛不易被观察到， 影响实验效果。
⑤加B染液后，将玻片稍加热（但不能太热，更不能沸腾或蒸干）使其微冒蒸汽，30～60s，染色效果较不加热为好。
⑥B染液染完后，用蒸馏水冲洗比用自来水冲洗效果好