SPIDER邻近标记技术

提供商 ：上海京房生物

服务名称 ：SPIDER邻近标记技术

概述
根据结核分枝杆菌类泛素蛋白酶体系统中底物Pup分子在体外能够招募PafA连接酶发挥邻近标记作用的实验原理，上海交大团队研发了一套基于底物的新型邻近标记技术，命名为 Specific Pupylation as IDEntity Reporter(SPIDER)。该技术可应用于蛋白-蛋白、蛋白-核酸、蛋白-小分子相互作用的筛选和发现。
相比其他生物分子-蛋白互作检测技术，该方法无需提前将标签和诱饵分子进行融合，摆脱对融合蛋白表达准确性的依赖，应用范围更广；此外，该技术可以用严苛的条件进行洗脱，降低非特异蛋白的干扰，富集能力强，结果准确性更高，同时兼具操作简单快捷的优点。

SA_m：改造过的链霉亲和素；PafA：结核分枝杆菌类泛素化连接酶；Pup^E：改造过的结核分枝杆菌类泛素蛋白

当靶蛋白(Prey)与带有生物素标记的生物分子(Bait)发生相互作用时，会同时与偶联了生物素的SA_m -Pup^E靠近，在PafA酶的催化作用下，Pup^E的C末端会与Prey蛋白表面的赖氨酸残基共价相连，从而实现对靶蛋白的捕获。该过程将生物分子与蛋白质之间的非共价结合相互作用转换为SA_m- Pup^E与靶蛋白的共价连接，从而能够稳定地用于后续靶蛋白的富集、鉴定和分析。