细胞转染

提供商 ：星森林（浙江）生物医学技术有限公司

服务名称 ：细胞转染

实验技术原理：
细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断 发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分 析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。

因为不同的细胞在生理代谢及分裂上均存在差异，因此研究者将外源遗传物质导入细胞的过程中需要选择 不同的方式。目前，将外源物质导入细胞的方法主要分为三大类：
1、脂质体（或是脂质体替代物）转染；
2、电转；
3、病毒感染。 这三种方法互有优劣。脂质体或是脂质体替代物转染操作简便，价格低廉，但是对细胞毒性大。而且，有 些细胞通过脂质体转染效率很低；电转操作方便快捷，但是需要专门的仪器，对细胞损伤也比较大；病毒 感染克服了前两者的劣势，感染效率高，对细胞毒性小，但是病毒前期包装需要大量的时间和精力 。

实验操作流程：
1、转染试剂的准备
a. 将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。
b. 震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。
2、选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体[1] 体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体 积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次 震荡。
3、将混合液在室温放置10-15分钟。
4、吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。
5、加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。
6、到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。
客户提供：
1、细胞株（可由我们代购）
2、转染基因信息、载体、转染细胞样本、相关文献和转染基因。也可由我们设计并收费合成含转染基因 的质粒。
3、冻存细胞样品，以干冰运输；培养细胞样品，密封培养瓶灌满生长培养基运输
交付标准：
1、转染细胞株
2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）
其他： 细胞转染时DNA量如果比较多，转染时培养基中如果有抗生素，是否会导致细胞死亡。