产品详情
文献和实验
相关推荐
库存 ：1000
保质期 ：1年
供应商 ：翼和生物
保存条件 ：-20℃保存
规格 ：盒
【产品规格】
- TL50 50*3 Reaction
- TL100 100*3 Reaction
【产品说明】
端粒（Telomeres）：是真核生物线性染色体末端的非编码串联重复性(TTAGGG)n阵列，端粒长度的变化，与衰老、癌症、或神经退行性等多种疾病相关。定量PCR法是检测端粒长度的经典技术，用时短，操作简单，结果准确，适用于批量样本检测。本产品试剂盒采用双色荧光 qPCR（SYBRgreen+VIC）检测
端粒相对长度，检测对象为血液、口腔拭子或细胞DNA。该试
剂盒具有以下特点。
- 稳定：全程闭管操作，无交叉污染。
- 可靠：端粒与内参单管检测，减少孔间干扰。
- 方便：操作简单，无需电泳步骤。
- 定量： △CT 值，可定量检测端粒相对长度。
【运输及保存条件】
低温冷冻运输， -20℃保存，有效期 1 年，冻融以后，4℃保存，有效期4周。【产品组分】
| 组分名称 | TL50 | TL100 |
| Biowing®Telomere Detection Mix | 1560µL | 3,120µL |
| Primer | 840µL | 1,680µL |
| Standard | 100µL | 200µL |
| RNase Free Water | 100µL | 100µL |
注：本试剂盒提供试剂，使用前请上下轻柔颠倒十次混匀，后低速离心、小心开启。避免起泡。
【操作步骤】
- 样品质控
注：标准品浓度已标化为15~20ng/µL，上样4µL。样品及标准品浓度过高或过低会影响扩增效率，对实验造成干扰，测量结果误差较大。
- qPCR反应体系及条件
反应体系以20µL为例
| 组分/样品管 | 待测样品管(µL) | 阴性对照管(µL) | 标准品对照(µL) |
| Biowing®Telomere Detection Mix | 10.4 | 10.4 | 10.4 |
| Primer | 5.6 | 5.6 | 5.6 |
| RNase Free Water | 0 | 4 | 0 |
| Standard | 0 | 0 | 4 |
| Sample | 4 | 0 | 0 |
PCR仪设置以 ABI 7500为例，其他型号定量PCR仪应通过标准品进行参数校正或咨询专业技术人员。
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | |
| 1 | 预变性 | 1 | 95℃ | 2 min |
2 |
变性 | 40 |
95℃ | 15 s |
| 退火 | 50℃ | 1 min | ||
| 延伸 | 72℃ | 45 s | ||
| 温度选择：50℃退火时收集荧光信号 | ||||
| 通道选择：样本检测通道-SYBRgreen；内参检测通道-VIC | ||||
【基线设置】
内参基线设定：以标准品基线设定内参基线，将内参的基线设定为6~12个循环。
端粒基线设定：以标准品基线设定端粒基线，将端粒的基线设定为3~7个循环。
【阈值设置】
内参阈值设定：以标准品CT值设定内参扩增曲线阈值，将内参的 CT 值定为 17±1。
端粒阈值设定：以标准品CT值设定端粒扩增曲线阈值，将端粒的 CT 值定为12±1 。
说明：
（1）如果标准品的内参CT 值>25，但阴性对照管的内参CT 值正常， 表明试剂盒扩增效率下降或仪器运行障碍。（2）如果阴性对照管的内参或端粒CT＜25，表明在环境或加样过程中存在轻微污染。
备注：
- 样本检测以及标准品的使用应做技术上三重复，阴性对照做单重复。
- 如果检测样本为血液DNA，可以将所得端粒相对长度在上海翼和应用生物技术有限公司构建的1500例中国人群数据库比对，评估样本个体端粒的相对长度；若选用其他样本，建议自行构建数据库并做进一步分析。
- 端粒长度计算方法（T/S）：先分别计算标准品与样品的△CT=CT（端粒）-CT（内参）
再计算 T/S=2-(△CT(样品)-△CT（标准品）)
注：T为待测样品，S为标准品，T/S为待测样品与标准品的端粒相对长度比
上海翼和应用生物技术有限公司
实名认证
钻石会员
入驻年限：2年
