尿液外泌体核酸提取试剂盒（磁珠法）

保存条件 ：2°C-30°C

【产品名称】
尿液外泌体核酸提取试剂盒（磁珠法）
【产品简介】
在人体尿液中，外泌体核酸通常以小片段的形式存在，本产品通过独特的外泌体分离及富集缓冲液，高效、特异的富集尿液外泌体，应用二氧化硅磁珠技术，具有选择性结合特性，可高效回收核酸片段，通过多个清洗步骤和DNase除去杂质和DNA，从尿液中高效纯化外泌体RNA，纯化的RNA产量高。
【包装规格】
50人份/盒
【预期用途】
主要用于甲基化分析中核酸的提取、富集、纯化等步骤。
【检验原理】
在人体尿液中，外泌体核酸通常以小片段的形式存在，本产品应用二氧化硅磁珠技术，具有选择性结合特性，可高效回收核酸片段，通过多个清洗步骤和DNase除去杂质和DNA，从尿液中高效纯化外泌体RNA，纯化的RNA产量高。
【贮存条件及有效期】
贮存于2°C-30°C干燥的环境中，有效期限为24个月。
【适用仪器】
转速可达12000rpm以上的高速离心机、磁力架、迷你低速离心机、漩涡混合器。
【样本要求】 【操作步骤】
1、试剂准备
   试剂盒使用前，请确保裂解液完全溶解无结晶析出。
2、样本准备(外泌体分离)
如果是冰冻的尿液样本，将其置于室温（15-30℃），待其完全融化后，将尿液放至低速离心机中，3500rpm离心15min，去除杂质；取上清转移到两个1.5ml离心管各1ml，每管分别加入400µL外泌体分离液，涡旋混匀10s，放至高速离心机中，12000rpm离心10min，吸除上清。（注意：要尽量吸除多余液体，以免影响核酸提取）
3、外泌体核酸的提取和纯化
3.1外泌体核酸裂解
向上述离心管分别加入155µL裂解液，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，室温静置5min后将两管混合液混合成一管共310µL，依次加入270µL乙醇、10µL磁珠，涡旋混匀10s，室温放置10min（每2min上下颠倒5次，使磁珠分布均匀），低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；
3.2核酸洗涤
向上述1.5mL离心管中加入600µL洗液一，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；
向上述1.5mL离心管中加入600µL洗液二，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；
3.3消化外泌体DNA
   在离心管中加入60µL DNase，漩涡混匀器混匀10s，室温静置15min，待DNA消化完全；
3.3核酸RNA洗涤
结束后，向上述1.5mL离心管中加入600µL洗液二，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；
向上述1.5mL离心管中加入600µL洗液三，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；
将上述1.5mL离心管低速瞬时离心，放置磁力架上，磁吸1min，吸走多余的废液，打开上述1.5mL离心管盖，室温干燥2min；
3.4核酸RNA洗脱
向上述1.5mL离心管中加入30-60µL洗脱液，盖紧管盖，涡旋混匀10s，室温静置3min，每隔1min用漩涡混匀器混匀5s（使磁珠分布均匀），低速瞬时离心，把离心管放置磁力架上，磁吸2min，将试剂转移至新的1.5mL离心管，盖紧管盖。如果提取的核酸不立即使用，可将其置于-20°C以下储存。
【性能指标】
经本试剂盒提取的核酸，检测Ct值的CV≤5.0%。
【产品特点】
1. 高效富集外泌体，排除细胞干扰；
2. 无需氯仿等有机试剂，安全无毒；
3. 可于液体工作站，磁珠法自动提取纯化系统匹配使用
4. 提取的核酸具有高纯度，无需再次纯化即可直接用于下游实验