细胞RNA核酸免提取试剂盒

保质期 ：1年

供应商 ：山东绿都

保存条件 ：室温保存

规格 ：50T

细胞RNA核酸免提取试剂盒

试剂盒应用
本试剂盒采用专用裂解液CP在10分钟内完成细胞的裂解、提取和纯化。无需使用蛋白酶K、无需低温离心。该配方中含有RNA保护剂，能够抑制RNA降解、保护RNA完整，从而提高RNA产量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文库构建等。
本试剂盒仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等领域。

试剂盒组成

组分	Col-R0102（50T）	编号
裂解液CP	35 mL	Col-R0102A
洗涤液CPW	12 mL	Col-R0102B
洗脱液C	5 mL
RNA吸附柱	50套	Col-R0102D

备注：第一次使用前，在洗涤液CPW中加入48mL无水乙醇，并标记“√”和时间，避免重复加入。

保存条件
室温保存一年。

自备材料
水浴锅或金属浴、无水乙醇、1.5mL无RNase离心管、DNase I（2U/μL，或货号QR0102）

使用方法

1. 样本准备

1.1 悬浮细胞1,000rpm离心5分钟，收集细胞沉淀。
或贴壁细胞用胰酶消化细胞后1,000rpm离心5分钟，收集细胞沉淀。
1.2 细胞数量<5×10⁶个时，加入500μL裂解液CP。细胞数量为5×10⁶~1×10⁷个时，加入700μL裂解液CP。轻轻吹打混匀。55℃孵育1分钟。
1.3 12,000rpm离心1分钟。
1.4 细胞数量<5×10⁶个时，取450μL上清。细胞数量为5×10⁶~1×10⁷个时，取650μL上清。
1.5 加入0.5倍体积无水乙醇，充分混匀。按照步骤2.1-2.7操作。
 

1. RNA纯化

2.1全部加入RNA吸附柱中，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液。
2.2向RNA吸附柱中加入500μL洗涤液CPW，12,000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液。
2.3 重复步骤2.2一次。
2.5 12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。
2.6 将RNA吸附柱放入新1.5mL无RNase离心管中，加入30-50μL洗脱液C，室温放置1分钟。
2.7 12,000rpm离心2分钟，得到RNA溶液，-80℃保存。

注意事项

1. 务必在超净台中进行操作，常换手套，防止RNA降解。
2. 尽可能使用新鲜样本进行RNA提取。
3. 使用无DNase无RNase的吸头和离心管，防止RNA降解，常更换吸头，防止交叉污染。
4. 为了提高洗脱效率，可提前将洗脱液CP置于65℃水浴后再使用。
5. 根据后续试验需求，请使用DNase I（货号QR0102）进行基因组清除。

常见问题解析

问题	可能原因	推荐解决方案
RNA吸附柱 堵塞	上样量太高 加入RNA吸附柱的液体中有固体成分或沉淀物	减少上样量。 增加离心时间。 切勿吸取到可见固体成分。 再次离心。
RNA得率低	未离心下来 样本量太大，裂解不充分	减少样本量。 重复洗脱步骤一次。
RNA降解	样本不新鲜 RNA酶污染	使用新鲜样本。 使用保存在样品保存液中样本。 样本保存在-80℃甚至液氮中，尽可能现取现用。 常更换手套。 常更换吸头和离心管。 使用无DNase无RNase的吸头和离心管。

长期提供原核、真核蛋白表达构建服务
武经理 18266598399 同微信 ，0543-3202800
QQ ：524402845
 Email：lvdukeji@126.com  
网址：http://www.landubio.com/  
长期 提供抗原偶联、 HRP、生物素、糖基化、亲和素、FITC等偶联标记多肽、抗体、抗原、蛋白等服务