细胞实验-cck8实验

提供商 ：北京MDL

服务名称 ：细胞实验

一 实验材料及试剂

细胞，96孔细胞培养板、CO2培养箱、酒精灯、微量移液器、酶标仪、CCK-8试剂盒等。

实验步骤

Protocols

一， 取生长状态良好的细胞制备成一定浓度的细胞悬液，每孔100ul加入96孔细胞培养板中。通常细胞增殖实验每孔加入2×103个/100ul 细胞，细胞毒性实验每孔加入5×103个细胞/100ul （具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定)。如果是贴壁细胞，需要37℃培养箱进行预培养2-6小时等细胞贴壁后再开展实验，如果是悬浮细胞，不需要预培养。

二， 根据实验需求，在培养孔中加入0-10ul待测样本继续培养适当时间。如果是做细胞毒性试验，加入毒性物质后的培养时间需要摸索。要看毒性物质的性质和细胞的敏感性，一般要根据细胞周期来决定，起码要1-2代以上的时间。

三， 取10ul CCK-8溶液加入96孔细胞培养板，在37℃培养箱中继续孵育0.5-4小时。

四， 测定吸光度。建议采用双波长进行测定，检测波长430-490nm，参比波长600-650nm，或者采用450nm单波长检测。