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库存 :69
英文名 :Acinetobacter spp.
CAS号 :/
保质期 :1年
供应商 :上海晅科生物科技有限公司
保存条件 :-20℃
规格 :50次
不动杆菌属通用PCR试剂盒英文名称:Acinetobacter spp.
不动杆菌属(Acinetobacter spp.)广泛分布于外界环境中,主要在水体和土壤中,易在潮湿环境中生存,该菌粘附力极强,易在各类医用材料上粘附,而可能成为贮菌源。此外,本菌还存在于健康人皮肤、咽部,也存在于结膜、唾液、胃肠道及阴道分泌物中。感染源可以是病人自身(内源性感染),亦可以是不动杆菌感染者或带菌者,尤其是双手带菌的医务人员,传播途径有接触传播和空气传播。易感者为老年患者、早产儿和新生儿,手术创伤、严重烧伤、气管切开或插管、使用人工呼吸机、行静脉导管和腹膜透析者,广谱抗菌药物或免疫抑制剂应用者等,因此快速检测不动杆菌属通用具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以PCR技术为基础开发的专门检测不动杆菌属通用的试剂盒。
产品特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增不动杆菌属通用。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
不动杆菌属通用PCR试剂盒包装规格及成分:
编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 mL(红盖) |
试剂二 |
超纯水 | 1 mL(亮黄色) |
试剂三 |
不动杆菌属通用PCR 引物混合液 | 100 μL(白盖) |
试剂四 |
不动杆菌属通用PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL(黄盖) |
试剂五 |
使用手册 | 1 份 |
运输及保存:低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。
自备试剂:DNA 模板
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求 的样品起始量)中加 10μL 不动杆菌属通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 | N+2 个 样品管 | PCR 阴性 对照 | PCR 阳性 对照 |
PCR Magic Mix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
不动杆菌属通用PCR 引物 混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | ||
PCR 阴性对照(水) | 18 μL | ||
PCR 阳性对照(不动杆菌属通用PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液) | 18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) | 95℃ | 30 sec |
55℃ | 30 sec | |
72℃ | 30 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。
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