Pfu PCR MasterMix（5×1mL）

供应商 ：北京赛百盛基因技术有限公司

规格 ：5×1mL

为高保真性提出的解决方案
 

目录号：PPM-5

 

产品概述

Pfu DNA聚合酶是我们为满足对保真性有较高需求的实验（如要求高保真的长片段扩增）所提出的解决方案。

本产品包含Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。其中Pfu DNA聚合酶是一种耐热性DNA聚合酶，分子量90KD，催化5'→3'DNA合成。DNA聚合时的延伸速度为600bp/min，最佳温度为65-75℃，dNTPs的工作浓度为100-300µM，最佳Mg2+浓度为2-3mM，最佳pH为8.1-9.1。

Pfu DNA聚合酶具有独特的3'→5'外切核酸酶活性，能修正错配碱基，从而保证DNA扩增的高保真度，无5'→3'外切核酸酶活性。Pfu DNA聚合酶扩增质粒模板可达10kb，扩增基因组模板可达6kb，尤其适用于长度2kb DNA的高保真扩增，使用方法同Taq DNA聚合酶。DNA扩增（PCR）时，20µl反应体系需1-1.5unit，50µl反应体系需2-3units。

使用预先配制的2× Pfu PCR MasterMix，只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了移液操作，最大限度提高了通量和结果的重现性。扩增产物为平整末端不带A，纯化后可直接用平末端载体克隆。绿色的染料在1%的琼脂糖凝胶中与3-5kb DNA片段的迁移率相同，黄色的染料在1%的琼脂糖凝胶中比引物迁移得快（＜50bp）。

 

使用说明

1.冰浴中彻底融化2×MasterMix，混匀后短暂离心。

2.我们强烈建议客户购买本产品后分装成小份避免反复冻融。

3.以50μl反应体系为例，按照下表在0.2ml PCR管中加入下列成分：

4. 短暂离心将反应液收集到管底。

5. 若基因扩增仪不防蒸发，请加1-2滴石蜡油。

6. 在PCR仪上执行以下程序（仅供参考）：

注：在实际操作中需根据模板的结构、扩增片段的大小和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。