产品详情
文献和实验
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保存条件 ：2-8摄氏度
保质期 ：1年
供应商 ：信至利达
规格 ：50t
发表文献最高影响因子IF=41.44
实验原理
Elabscience®自主研发的 Annexin V-FITC/PI Apoptosis Kit，可用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡。
Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 (PS) 有高度亲和力。当细胞发生
凋亡时，膜内侧的磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻到膜表面，而被荧光染料 FITC 标记的 Annexin V 结合，可
通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。
由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，而碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）可与双链 DNA 特异
性结合并产生强烈的荧光，与 Annexin V 搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。
本试剂盒检测喜树碱诱导的 Jurkat 细胞凋亡效果如下图所示：
试剂配制
1×Annexin V Binding Buffer：取 1 mL Annexin V Binding Buffer (10×)加入 9 mL 去离子水中混匀。
实验操作
一步法
1． 细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 ×g 离心 5 min，弃上清，收集细胞，PBS 洗涤一次，轻轻重
悬细胞并计数。
2． 取 1~5 × 105 重悬的细胞，300 ×g 离心 5 min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加
入 500 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer 重悬细胞。
3． 细胞悬液中加入 5 μL 的 Annexin V-FITC Reagent 和 5 μL 的 PI Reagent (50μg/mL)。
4． 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。
5． 立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于 1 小时内完成检测。
注：流式细胞仪检测时 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI 优先选择 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 ECD 通道。
两步法
1． 细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 ×g 离心 5 min，弃上清，收集细胞，PBS 洗涤一次，轻轻重
悬细胞并计数。
2． 取 1~5 × 105 重悬的细胞，300 ×g 离心 5 min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加
入 100 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer 重悬细胞。
3． 细胞悬液中加入 2.5 μL 的 Annexin V-FITC Reagent 和 2.5 μL 的 PI Reagent (50μg/mL)。（由于两步法
分辨率更高，染色液用量减半依然可得到媲美一步法的效果；用户亦可根据自己的模型进行滴定后
加入适量的染色液，用更少的量获得高质量的结果。）
4． 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。
5． 加入 400 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer，混匀样本。
6． 立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于 1 小时内完成检测。
注：流式细胞仪检测时 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI 优先选择 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 ECD 通道。
注意事项
1. 本产品仅供科研使用。
2. 检测贴壁细胞时，需收集诱导凋亡后产生的悬浮细胞，并与后续收集的贴壁细胞一起检测。
3. 应尽量避免消化贴壁细胞带来的机械损伤。同时，胰酶的消化液中应尽量不含 EDTA，因为 EDTA
会影响 Annexin V 与磷脂酰丝氨酸的结合。
4. 如果使用含 EDTA 的胰酶，收集细胞后应充分清洗，确保 EDTA 被去除干净。
5. 染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
6. 荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽
量注意避光保存。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
北京信至利达商贸有限公司
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入驻年限：2年
