单细胞全基因组扩增试剂盒

保存条件 ：-20℃/-70℃冻存

保质期 ：12个月

英文名 ：Single Cell WGA Kit

库存 ：大量

供应商 ：康为世纪

规格 ：24 rxns/96 rxns

目录号：CW2843S (24 rxns) CW2843M (96 rxns)


保存条件：请于干冰中寄送，在收到试剂盒后立即将所有组分储存于-20℃ 恒温冰箱中，可保存6个月。如需更长期储存请-70℃以下存放。


产品简介

单细胞全基因组扩增试剂盒基于MDA的等温扩增体系，可以以单个细胞或者微量 样本为模板实现全基因组扩增。单细胞全基因组经扩增后扩增产物大小在2-100 kb间， 可广泛适用于二代测序、大片段拷贝数变异分析、微卫星分析、qPCR分析、基因芯片 分析等。 本试剂盒使用的Phi29 DNA聚合酶是从噬菌体中克隆的DNA聚合酶，具有很强的链 置换活性和链亲合力，单次聚合反应可以实现长达100 kb的连续聚合延伸，其扩增产物 适用于多种下游应用，Phi29 DNA聚合酶还具有很强的3’-5’外切酶活性，保证了DNA合 成的高保真性。正常情况下一个反应可以产生大于20μg高覆盖度的基因组DNA。


自备仪器
试剂
离心机
水浴锅或PCR仪 反应管：建议使用低吸附的PCR管
枪头：建议使用高质量过滤枪头防止污染
去离子水


注意事项
1、本产品检测灵敏度极高，实验操作应在正压的超净工作台中完成，扩增反应产物浓度较高，应做好隔离，避免扩增产物导致的气溶胶污染。
2、以低质量的样品为模板会影响最终的扩增产物质量，应尽量避免使用大量降解和片段 化的DNA作为起始样本。 


操作步骤

细胞为模板扩增：本方案适用于以1-1000个细胞为模板进行全基因组无差别扩增。应使用新鲜制备的细 胞样品，以保证起始基因组的完整性，请勿使用已发生凋亡的细胞。

1．准备Buffer D2(下表给出的Buffer D2体积足够12个反应，一次实验未完全用完可储存于-20°C ， 但储存时间不能超过3个月)。
 
2．将4 μl细胞样品(重悬于PBS中)加入到PCR管中。 如果样品体积少于4 μl，请使用PBS 补足到4 μl。

3．加入3μl Buffer D2，轻弹管壁混匀并短暂离心收集。请确保细胞没有粘附在管壁上， 请勿使用移液器吹打，避免细胞样品粘附到移液器的吸头上。

4．样品65℃孵育10 min。

5．加入3 μl Buffer N，轻弹管壁混匀并短暂离心。在下步反应准备好之前请将样品置于 冰上。

6．按照下表准备反应混合液，混匀并短暂离心。

7．立即将40 μl反应混合液加入到准备好的10 μl DNA样品中(第5步)，轻弹管壁混匀并短 暂离心收。

8．30℃孵育2h，如有需要可延长孵育时间增加产量。

9．65℃孵育5 min失活SC-DNA Polymerase。 注：扩增产物是高浓度基因组DNA，请使用水或者TE稀释到合适的浓度后进行下游实 验。扩增产物可广泛应用于全基因组和外显子测序、qPCR分析、基因芯片分析等。


基因组为模板扩增：本方案适用于大于1 ng纯化的基因组DNA为模板进行全基因组的无差别扩增，如果基因 组完整度与纯度足够高，更少的起始DNA也可以使用。

1．准备Buffer D1及N1(下表给出的体积足够12个反应，一次实验未完全用完可储存于 -20°C ，但储存时间不能超过3个月)。

2．将2.5 μl DNA样品加入到PCR管中，如果样品体积少于2.5 μl，请使用水或者TE补足 到2.5 μl。 3．加入2.5 μl Buffer D1，轻弹管壁混匀并短暂离心。 4．室温（15-25℃）孵育3 min。 5．加入5 μl Buffer N1，轻弹管壁混匀并短暂离心。下步反应准备好之前请将样品置于 冰上。

6．按照下表准备反应混合液，混匀并短暂离心。

7．立即将40 μl反应混合液加入到准备好的10 μl DNA样品中(第5步)，轻弹管壁混匀并短 暂离心收集。

8．30℃孵育2h，如有需要可延长孵育时间增加产量。

9．65℃孵育5 min失活SC-DNA Polymerase。 注：扩增产物是高浓度基因组DNA，请使用水或者TE稀释到合适的浓度后进行下游实 验。扩增产物可广泛应用于全基因组和外显子测序、qPCR分析、基因芯片分析等。