外周血游离核酸提取试剂盒（磁珠法）

保存条件 ：2 -30°C

【产品名称】
外周血游离核酸提取试剂盒（磁珠法）
【包装规格】
50人份/盒
【检验原理】
在人类血浆中，游离核酸通常以小片段的形式存在，本产品应用硅胶膜技术，具有选择性结合特性，可高效回收核酸片段，通过多个清洗步骤除去杂质，从血液中高效纯化游离DNA和RNA，纯化的核酸产量高。
【主要组成成份】

序号	名称	数量	规格
1	裂解液	1瓶	90mL/瓶
2	蛋白酶K	1瓶	10mL/瓶
3	磁珠	1管	1mL /管
4	结合液	2瓶	80mL/瓶
5	洗液A	1瓶	50mL/瓶
6	洗液B	1瓶	30mL/瓶
7	洗液C	1瓶	30mL/瓶
8	洗脱液	2管	2mL/管

【样本要求】
1.样本类型：人外周血样本。
2.样本的采集：
使用K2EDTA或游离核酸采血管，按照生产厂家建议采血10mL，血样应该立即处理。K2EDTA采血管在血浆制备前，血液保存在2-8℃，不超过24小时，不要冰冻血样。游离核酸采血管在血浆制备前，可以保存在15-25℃，不超过72小时，不要冰冻血样。
3.血浆的制备和保存：
将采血管放入离心机进行离心，转速1350±150rcf，离心12分钟（禁止使用离心机的刹车功能，以防止血细胞层的破坏）；从离心机中取出采血管，用新的一次性移液管把血浆转移到聚丙烯材质，圆锥底的15mL离心管中，再次离心，转度1350±150rcf，离心12分钟。用新的一次性移液管或者血清移液管把血浆加入新的离心管中，标记好样本号。血浆样本可以立即用于检测，或2℃-8℃保存（不超过24h），-15至-25℃条件下样本可保存一个月，低于-70℃条件下样本可保存六个月。参考离心机操作手册将rpm换算为rcf。
【操作步骤】
1.试剂准备
试剂盒使用前，请确保裂解液完全溶解无结晶析出。
2.样本准备
如果是冰冻的血浆样本，将其置于室温（15-30℃）融化30分钟，样本必须在融化后60分钟内进行裂解程序。
3.核酸提取纯化
3.1核酸裂解吸附
根据样本量，按照下表在事先标记的1.5mL或15mL离心管中依次加入：血清或血浆样本、蛋白酶K、裂解液，盖紧管盖，涡旋混匀，把离心管在56℃水浴中放置10±1分钟。

样本	0.2mL	0.4mL	0.6mL	0.8mL	1mL	1.2mL	1.4mL	1.6mL	1.8mL	2mL
蛋白酶K	0.02mL	0.04mL	0.06mL	0.08mL	0.1mL	0.12mL	0.14mL	0.16mL	0.18mL	0.2mL
裂解液	0.18mL	0.36mL	0.54mL	0.72mL	0.9mL	1.08mL	1.26mL	1.44mL	1.62mL	1.8mL

3.2核酸结合
根据样本量，按照下表向上述1.5mL或15mL离心管中依次加入结合液和无水乙醇盖紧管盖，涡旋混匀，再加磁珠，盖紧管盖，涡旋混匀，室温放置10min，每隔2分钟涡旋混匀1次，约5秒。然后把离心管放入磁力架磁吸3min，丢弃废液，（也可用离心法完成，3000rpm，3min）。

样本	0.2mL	0.4mL	0.6mL	0.8mL	1mL	1.2mL	1.4mL	1.6mL	1.8mL	2mL
结合液	0.32mL	0.64mL	0.96mL	1.28mL	1.6mL	1.92mL	2.24mL	2.56mL	2.88mL	3.2mL
无水乙醇	0.26mL	0.52mL	0.78mL	1.04mL	1.3mL	1.56mL	1.82mL	2.08mL	2.34mL	2.6mL
磁珠	2µL	4µL	6µL	8µL	10µL	12µL	14µL	16µL	18µL	20µL

3.3核酸洗涤
向上述离心管中加入1mL洗液A，涡旋混匀，（如果上述离心管为15mL离心管则将试剂转移到1.5mL离心管中），放入磁力架磁吸2min，丢弃废液。
向上述1.5mL离心管中加入0.6mL洗液B，涡旋混匀，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液。
向上述1.5mL离心管中加入0.6mL洗液C，涡旋混匀，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液。
将上述1.5mL离心管低速瞬时离心，放入磁力架磁吸1min，吸去多余的废液，打开上述1.5mL离心管盖，室温干燥2分钟。
3.4核酸洗脱
向上述1.5mL离心管中加入50-100µL洗脱液，盖紧管盖，涡旋混匀，56°C金属浴孵育3min，每隔1分钟涡旋混匀1次，约5秒（使磁珠充分悬浮在洗脱液中），放入磁力架磁吸2min，将试剂转移至新的1.5mL离心管，盖紧管盖。如果提取的核酸不立即使用，可将其置于-20°C以下储存。
【性能指标】
经本试剂盒提取的核酸，检测Ct值的CV≤5.0%。
【产品优势】
1 该试剂盒可针对性的结合血浆及血清中的游离小片段DNA。
2 可手工提取也可适用于多种高通量平台批量提取。
3 灵敏性高，可捕获血清或是血浆中低至50pg/ml的游离循环DNA片段。
4 所得产物可以用于下游各类检测及NGS分析。
5 适用于全自动机械化多样品平台操作，免去了离心及真空等耗人工的操作步骤。
6 磁珠法与传统离心柱比较，可保证从样品中提取出来的DNA 损失可降至最低。