Stable化学感受态细胞

库存 ：999

英文名 ：Stable化学感受态细胞

供应商 ：圻明生物

保存条件 ：-80°

产品简介

Stable 高转化效率菌株是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株，特别适合于慢病毒或具有末端重 复序列 DNA 片段的克隆。基因组含有 recA1 和 relA1 突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降 低错误重组的概率；同时含有核酸酶 endA1 突变，避免了提取质粒过程中核酸酶的污染，大 大提高了高纯度病毒质粒的产量和质量。lacZΔM15 的存在使 Stable 可用于蓝、白斑筛选，此菌株 具有四环素和链霉素抗性。利用该菌株克隆含有重复序列的 DNA 时，推荐在 30 ℃进行培养。经 pUC19 质粒转化检测，Stable 感受态细胞的转化效率可达 108 cfu/μg DNA。

产品组成

组分    CC96175-01    CC96175-02    CC96175-03
Stable化学感受态细胞    10 × 100 μL    100 × 100 μL    定制
基因型：F' proAB lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR ) ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14- φ80 ∆lacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR ) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS -mcrBC)

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 30 ℃预热），后置于 30 ℃摇床复壮 60 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上：若克隆的质粒中含有重复 序列时，将平板置于于 30 ℃培养箱培养 24 h；否则，则可以将平板置于 37 ℃过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。