一步法多重定量RT-qPCR试剂盒

一步法多重定量RT-qPCR试剂盒

价格: ¥885

品牌:翌圣生物(Yeasen) 品牌认证

货号:13117ES60

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产品详情

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库存 :现货

英文名 :Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

CAS号 :点击查看

保质期 :一年

供应商 :翌圣生物科技(上海)股份有限公司

保存条件 :-20度

规格 :100T

产品描述
 

Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。独特的Buffer设计,在体系中不包含影响冻干工艺的化学试剂,可用于一步法RT-qPCR冻干反应体系的配制和产品设计。

本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干Buffer,Enzymes Mix等,缓冲液中已含有Mg2+和dNTP等,并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够在保证引物扩增效率的同时,进行多重荧光定量扩增反应。


产品组分

【注】1) 4×Hifair® V Lyo-Buffer为Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。

 2) Hifair® V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。


适用机型
 

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™,ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex,Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™,Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™,Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000,Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96,Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR


运输与保存方式
 

冰袋运输。

4×Hifair® V Lyo-Buffer -20℃保存,有效期1年,Hifair® V Lyo-Enzyme Mix 4℃保存。有效期6个月。

本品避免反复冻融。建议分装保存。


注意事项
 

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途!

 

反应体系(以25 μL为例)
 

组分

体积(μL)

终浓度

4×Hifair® V Lyo-Buffer

6

Hifair® V Lyo-Enzyme Mix

1

-

Primer Mix (10 μM)

各0.4

0.2 μM

Probe Mix (10 μM)

各0.2

0.1 μM

模板 RNA

1-5 μL

-

RNase Free H2O

to 25 μL

-

】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度:Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度:Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系:推荐使用25 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。


标准扩增程序
 

 

反应阶段

温度

时间

循环数

1

逆转录

50℃a

10 min

1

2

预变性

95℃

5 min

1

3

扩增反应

95℃

15 sec

45

60℃b

30 secc

【注】                                                                                             

a) 逆转录:42℃或者50℃均可,时间 10-15 min。

b) 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1abN引物,退火温度建议≥60℃。

c) 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。


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