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文献和实验
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保存条件 :零下70℃
保质期 :6个月
英文名 :EHA105(pSoup)农杆菌感受态细胞
库存 :大量
供应商 :南京万木春生物
CAS号 :EHA105(pSoup)农杆菌感受态细胞
规格 :100ul ×20
EHA105(pSoup)农杆菌感受态细胞
产品信息:组成 BC313-01
EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell 20×100μl
pGs2 (100ng/μl) 1 支
储存条件:-70℃保存,避免反复冻融。不适合在液氮中保存。
基因型:C58 (rifR ) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)(strep R)Succinamopine pSoup(tetR)
产品介绍:
农杆菌EHA105(pSoup)菌株由EHA105菌株改造而来,为C58型背景,核基因中含有利福平抗性筛选基因rif。此菌株携带一无自
身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir 基因(vir 基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,
pEHA105(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。一些缺失农杆菌
复制相关元件(如pVS1的复制起点REP区或pVS1质粒的STA区)的表达质粒如pGreen、pGreenII-62SK和pGs2等不能在EHA105菌株中繁殖。pSoup辅助质粒可以帮助这些不完整双元表达质粒在农杆菌中的复制。EHA105(pSoup)菌株具有四环素(Tet)抗性。
EHA105(pSoup)适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。经植物表达质粒pGs2检测,转化效率可达10 3 cfu/μg,-70℃保存12 个月转化效率不发生改变。
转化方法:(采用冻融方法)
1. 取-70℃保存的EHA105(pSoup)农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化;
2. 无菌条件下,向感受态细胞中加入100ng-1μg质粒DNA(第一次使用,最好做一下预实验,确定所加质粒的最佳量),轻轻
混匀,冰水浴中静置5 分钟;
3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟;(注:可用干冰和无水乙醇混合物代替液氮)
4. 然后快速将离心管置于37℃水浴中保持5分钟,不要晃动水面;
5. 将离心管放回冰水浴中,冰浴5分钟;
6. 无菌条件下加入800μl无抗生素的2xYT、SOB、SOC或LB液体培养基,于28℃振荡培养2-3小时,菌体复苏;
7. 6000rpm离心1分钟收菌,留100μl左右上清,轻轻吹打重悬菌体,取适量菌液,涂布于相应抗生素的LB平板上,于28℃培养
箱中倒置培养48-72小时。(实验表明当平板只含有50μg/ml的Kan时,28℃培养48 h即可看到菌落;平板中含有50 μg/ml Kan
和20 μg/ml Rif 时,需28℃培养60 h可看到菌落; 如果平板中含有50 μg/ml Kan和50 μg/ml Rif时则需要28℃培养72-90 h可看
到菌落)。
注意事项:
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化
效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量。
4. 利福平浓度不应高于25 μg/ml,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。
5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长和筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti 质粒筛选抗生素可防止Ti 质粒丢失,
但Ti 质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素,Ti 质粒丢失的概率极低(可以
忽略)。
6. 相关抗生素配制及工作浓度
利福平(Rif)用DMSO配制成20mg/ml的储存液,工作浓度为20μg/ml。盐酸四环素(Tet)用甲醇溶解成10mg/ml的储存液,
工作浓度为10μg/ml。硫酸卡那霉素(Kan)、硫酸链霉素(Strep)、硫酸庆大霉素(Gent)和羧苄青霉素钠盐(Carb)分别
用双蒸水配制成浓度为50mg/ml,50mg/ml、40mg/ml和50mg/ml的储存液,并用0.22μg滤器过滤除菌。工作浓度分别为
Kan:50μg/ml,Strep:50μg/ml,Gent:40μg/ml和Carb:50μg/ml。
E 、感受态细胞 |
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E-1 、大肠杆菌克隆感受态细胞 | |||
货号 | 产品名称 | 规格 | 单位 |
BC101-01 | TOP10 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC101-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC102-01 | DH5α 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC102-02 | DH5α 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
BC103-01 | JM109 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC103-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC104-01 | XL1-Blue 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC104-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC105-01 | Mach 1-T1 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC105-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC117-01 | Turbo 感受态细胞 | 100ul ×10 | 包 |
BC117-02 | 100ul ×20 | 包 | |
BC118-01 | Stable 感受态细胞 | 100ul ×20 | 包 |
BC106-01 | DH10B 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC106-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC107-01 | OmniMAX2-T1 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC107-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC108-01 | Stbl3 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
BC115-01 | Stbl4 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
BC109-01 | XL10-Gold 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
BC110-01 | JM110 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
BC111-01 | DB3. 1 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
BC112-01 | DH10BAC 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
BC113-01 | NEB 10-beta 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
BC114-01 | BJ5183-AD- 1 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
E-2 、大肠杆菌表达感受态细胞 | |||
货号 | 产品名称 | 规格 | 单位 |
BC201-01 | BL21(DE3) 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC201-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC202-01 | BL21(DE3) pLysS 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC202-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC203-01 | M15 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC203-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC204-01 | Rosetta(DE3) 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC204-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC205-01 | OrigamiB(DE3) 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC205-02 | 100ul ×20 | 包 | |
BC206-01 | T7 表达感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC206-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC207-01 | T7pLysY 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC207-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC208-01 | Shuffle T7-K12 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC208-02 | 100μl ×20 | 包 | |
BC209-01 | Shuffle T7-B 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
BC209-02 | 100μl ×20 | 包 | |
E-3 大肠杆菌电转感受态细胞 | |||
货号 | 产品名称 | 规格 | 单位 |
BC401-01 | NEB 10-beta 电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
BC402-01 | BJ5183 电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
BC403-01 | BJ5183-AD- 1 电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
BC404-01 | TOP10 电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
BC405-01 | DH5α 电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
E-4 农杆菌感受态细胞 | |||
货号 | 产品名称 | 规格 | 单位 |
BC301-01 | LBA4404 农杆菌感受态细胞 | 100ul ×20 | 包 |
BC302-01 | AGL1 农杆菌感受态细胞 | 100ul ×20 | 包 |
BC303-01 | EHA105 农杆菌感受态细胞 | 100ul ×20 | 包 |
BC304-01 | GV3101 农杆菌感受态细胞 | 100ul ×20 | 包 |
E-5 、农杆菌电转感受态细胞 | |||
货号 | 产品名称 | 规格 | 单位 |
BC305-01 | LBA4404 农杆菌电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
BC306-01 | AGL1 农杆菌电转感受电转态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
BC307-01 | EHA105 农杆菌电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
BC308-01 | GV3101 农杆菌电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
南京万木春生物科技有限公司(Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向国内外市场专业研发、生产和销售细胞、 外泌体、ELISA 试剂盒、 抗体、重组蛋白及相关试剂。产品在免疫学、信号转导、代谢、 神经科学等领域内都有最前沿科学文献发表,被国内外多所大学、研究机构和药学平台使用并发表文献多达1000多次。我公司凭借优异的产品和完善的服务 体系现已受到广大国内外用户的青睐和认可。
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重组蛋白:多项发明专利,原核表达系统稳定表达蛋白 1000 余种。
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