文献支持LBA4404 农杆菌感受态细胞

保存条件 ：零下70℃

保质期 ：6个月

英文名 ：LBA4404 农杆菌感受态细胞

库存 ：大量

供应商 ：南京万木春生物

CAS号 ：LBA4404 农杆菌感受态细胞

规格 ：100ul ×20

LBA4404 农杆菌感受态细胞

产品信息：

组成                                    BC301-01                                                                
LBA4404 Chemically Competent Cell                            20×100μl
pCAMBIA2301（100ng/μl）                    1 支
 
储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。
基因型：
Ach5 (rif R ) Ti pAL4404 (StrR ) Octopine
产品介绍：
LBA4404 菌株为 Ach5 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 Rif，为了便于转化操作，此
菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型 Ti 质粒 pAL4404，此质粒含有 vir 基因（vir 基因是 T-DNA 插入植物基
因组必需的元件，pAL4404 质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转
移）。pAL4404 型 Ti 质粒含有筛选标签：Strep，赋予 LBA4404 菌株链霉素抗性，适用于菸草、番茄、烟草等
植物的转基因操作，经植物双元 pCAMBIA2301 质粒检测，转化效率可达 10 3 cfu/μg，-70℃保存 12 个月转化
效率不发生改变。
转化方法
（采用冻融方法）
1. 取-70℃保存的 LBA4404 农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化；
2. 无菌条件下，向感受态细胞中加入 100ng-1μg 质粒 DNA（第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的
最佳量），轻轻混匀，冰水浴中静置 5 分钟；
3. 将离心管置于液氮中速冻 5 分钟；（注：也可以用干冰和无水乙醇混合物代替液氮）
4. 然后快速将离心管置于 37℃水浴中保持 5 分钟，不要晃动水面；
5. 将离心管放回冰水浴中，冰浴 5 分钟；
6. 无菌条件下加入 800μl 无抗生素的 2xYT 或 LB 液体培养基，于 28℃振荡培养 2~3 小时，菌体复苏；
7. 6000rpm 离心 1 分钟收菌，留 100μl 左右上清，轻轻吹打重悬菌体，取适量菌液，涂布于相应抗生素的
LB 平板上，于 28℃培养箱中倒置培养 48-72 小时。
（当平板只含有 50 μg/ml Kan 时，28℃培养 48 h 即可；平板中同时加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 时，需 28℃
培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 则需要 28℃培养 72-90 h）。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；
质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应
减少质粒用量。
4. 利福平浓度不应高于 25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。
5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入 Ti 质粒筛选抗生素
可防止 Ti 质粒丢失，但 Ti 质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑
这些抗生素，Ti 质粒丢失的概率极低(可以忽略)。


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