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库存 ：现货
英文名 ： CelCulSF 293 Cell Culture Medium（Serum-free）
CAS号 ：点击查看
保质期 ：一年
供应商 ：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
保存条件 ：2-8℃保存
规格 ：1000mL
产品描述
CelCulSF 293 Cell Culture Medium（Serum-free）培养基为无动物源、无蛋白的完全化学成分限定培养基。适应于HEK293各细胞系细胞（如HEK293F，HEK293T，HEK293H，Expi293 等）规模化无血清悬浮培养及后续转染表达。产品经过定向优化，尤其适应于AAV及蛋白等相关产品研发和生产过程，可支持细胞高密度扩增及稳定的产物表达。对HEK293各细胞类型具有广泛的适应性。为了适应不同培养体系及生产工艺，配套培养基产品提供对应补料，同时也可匹配其他商业化补料产品。
运输与保存方法
冰袋运输。2～8℃，避光保存，有效期1年。使用方法
一、标准参数| 参数 | 设定值 |
| 50mL TPP 管 | 培养体积： 10-20 mL |
| 125~1000mL 摇瓶 | 培养体积： 摇瓶总体积的 20~30% |
| 摇床转速 | TPP：转速 220Rpm, 摇瓶 110-130 Rpm |
| 摇床振幅 | 50mm |
| 培养基 | CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium（Serum-free） |
| 接种密度 | 0.5×106 cells/mL |
| 培养温度 | 37℃ |
| CO2% | 5% |
| 相对湿度 | 80%RH |
二、培养基的适应通常，在原用培养基中生长的HEK293细胞需要转移到由50%原用培养基和50%培养（CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium）组成的新培养基中进行适应性生长。
1. 细胞传代当天，取0.5mL细胞悬液，用细胞计数仪分析活细胞密度（×106细胞/mL）和细胞活率（%）。将原用培养基中生长的细胞移入新培养基*（50%CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium+ 50%原用培养基），接种密度为0.5×106/mL，传代后按照规定的环境条件培养细胞。
2. 细胞培养至48±3小时后，建议按此方法进行至少3次细胞适应性传代。当细胞活率高于90%时转入100% CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium培养基培养。
三、 细胞传代和扩增
1. 37℃水浴中预热CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium 培养基。
2. 使用75%酒精清洁/消毒生物安全柜。
3. 使用75%酒精喷洒培养基瓶，并置于生物安全柜。
4. 从培养箱中取出摇瓶（或TPP管），喷洒75%酒精并置于生物安全柜。
5. 接种密度为1.0×106 viable cells/mL。培养48±3小时后，取0.5mL细胞悬液，用细胞计数仪分析活细胞密度（×106细胞/mL）和活细胞（%）。
6. 传代前，如果细胞密度低于2.0 ×106/mL，或细胞活率低于80%，需要150g - 300g（大约800 rpm~1200 rpm）离心5分钟处理细胞。轻轻弃上清，使用100%新鲜培养基按0 .5×106/mL重悬细胞，并将细胞接种至新摇瓶（或TPP管），传代后按照规定的环境条件培养细胞。
7. 如果传代前细胞密度大于2.0×106/mL且活细胞率高于85%，则将适量的细胞悬液转移到新摇瓶（或TPP管）中，并用新鲜培养基直接调整最终培养体积进行细胞传代，然后在规定的环境条件下培养细胞。
如果传代比（传代后的种子密度：传代前的细胞密度）大于1:4，细胞需要离心并重新悬浮在100%新鲜培养基中。
四、细胞冻存
1. 细胞冷冻前，将含新鲜异丙醇的程序降温盒、冻存管等所需材料置于4℃冰箱中，预冷至少24小时后冷冻保存，或在-20℃下放置2小时~4小时后冷冻保存。
2 取样计数，检测分析活细胞密度（×106细胞/mL）和细胞活率（%）
注：冻存培养基 ：20% DMSO+80% CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium
3 根据冻存细胞的数量、冻存体积和冻存密度（建议冻存密度为10 - 20×106 /mL/支），
计算所需的细胞量，并移入离心管中，以800 rpm - 1500 rpm（即150 g - 300 g）离心5min。
4 弃上清液，拍打离心管底部使细胞均匀分散，加入冻存体积一半的生长培养基，轻轻吹打细胞，形成均匀的细胞悬液，见下表（示例及根据传代数据选择哪种培养基）：
| 培养基 | 成分 | 体积 | 终培养基 |
| 冻存培养基 | 20% DMSO+80% CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium | 10mL | 10% DMSO+90% CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium |
| 生长培养基 | CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium | 10mL |
用无菌移液管转移相同体积的冻存培养基（含20% DMSO），逐滴加入细胞悬液中。加入冻存培养基时，轻轻摇动离心管，保持细胞密度均匀；
5 用一次性无菌移液管将1mL - 1.5mL细胞冻悬液移入预冷冻存管中，置于冰上保存；
6 冻存细胞悬液在分装过程中需要反复混合。分装完成后，将冻存管转移至预冷的程序降温盒中，在-80℃冰箱中至少保存24小时；
7 转移至液氮罐中继续保存。
五、细胞复苏
1 D0复苏细胞
2 使用75%酒精清洁/消毒生物安全柜。
3 37℃水浴中预热CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium 培养基；
4 使用75%酒精喷洒培养基瓶，并置于生物安全柜；
5 从液氮罐中取出冻存管，并置于干冰上；
6 复苏1支细胞，并在37℃水浴中，轻轻晃动冻存管，解冻1分钟；
7 用75%酒精喷洒冻存管外壁；
8 用无菌移液管将冻存管中的细胞轻轻移到含有30 mL预热培养基（CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium）的离心管中。如有必要，使用预热的培养基（CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium）冲洗冻存管中的细胞；
9 150g - 300g（约800rpm - 1200rpm）离心5分钟，丢弃上清液并将细胞重悬于10 ~ 30mL新鲜预热培养基（CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium）中，然后使用预热培养基（CelCulSFTM 293 Cell Culture Medium）在摇瓶中将细胞密度调节至0.5×106cells/mL；
10 取0.5mL细胞悬液，用细胞计数仪分析活细胞密度（×106/mL）和细胞活率（%）。
11 如果细胞活率＞85%，将细胞置于规定的环境条件下培养细胞
12 传代、扩大培养细胞。
六、
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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钻石会员
入驻年限：17年
