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文献和实验
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服务名称 ：一个载体编码4条shRNA质粒同时过表达2个基因
技术简介： 将4个不同哺乳动物启动子（hU6、hH1、mU6和h7SK）分别操纵的shRNA转录结构单元（启动子－shRNA正义链－loop环－shRNA反义链－终止信号）构建到一个RNAi载体中，实现了一个载体编码4条shRNA。不同启动子转录各自相应的shRNA结构单元，有效避免意外重组，而且每条shRNA能够有效转录。还可以同时在该载体中表达2个基因。
产品特点：
1． 免除shRNA有效序列筛选
随着RNAi实验经验积累，专业RNAi公司通常能做到设计的每3个shRNA中，有一个针对目标基因的抑制效率达到70％或更高。在此基础上，一个载体编码4个shRNA专利产品基本可以做到每个产品都是有效的，免除了siRNA有效序列筛选实验。本公司使用该技术对50个基因设计的shRNA，49个基因干扰效率达到90％以上。
2． 可同时干扰多个不同的基因
例1：凋亡基因Bcl-2家族促凋亡基因包括Bak、Bad、Bid、Bax和Bcl-xs五个基因。关闭Bcl-2家族某一基因对于一些细胞凋亡调控不理想。如果同时关闭Bcl-2家族5个基因中的4个，则凋亡率会低得多。制备4个针对Bcl-2家族不同基因的shRNA结构单元，mU6－shRNA1针对 Bak； h U6－shRNA2针对Bad ； h H1－shRNA3 针对 Bid；h 7SK－shRNA4针对 Bax。构建到同一质粒载体上，导入细胞，提高细胞抵抗 凋亡因子。
例2：Ha－ras和c－myc二个癌基因可以协同作用促进肿瘤的转化、恶化和转移（http://www.ebiotrade.com/newsf/2006-11/2006111785922.htm）。AEG－1是Ha－ras和c－myc下游共同的靶分子。AEG－1被癌基因诱导后活化磷酸肌醇－3激酶的活化，Ha－ras又受到c－myc的调节。上述途径共同导致了肿瘤的恶化。使用RNAi技术单独关闭Ha－ras或c－myc均难以达到关闭癌基因的目的。利用一个载体编码多个shRNA技术，一个shRNA针对Ha－ras，一个针对c－myc，一个shRNA针对AEG－1、一个shRNA针对磷酸肌醇－3激酶。有可能实现对Ha－ras和c－myc的关闭，效果更好（本实验未实施，仅共参考）。
服务内容：
1. 一个载体编码四条针对同一基因的shRNA以减少筛选工作量或提高抑制效率。
2. 一个载体编码四条针对不同基因的shRNA。
实验步骤及周期：
制备一个载体四条shRNA的质粒所需时间为15个工作日
客户须知：
1． 所得质粒溶解在DEPC水中，应放在-20℃冰箱保存
2． 已转化质粒菌液应加50％甘油，-70℃冰箱保存
服务承诺：
1． 保证每条ShRNA编码序列都正确无误
2． 我们会提供测序结果电子版和彩图版
武汉市晶赛生物工程技术有限公司
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