植物RNA提取试剂盒(适用含高多糖多酚植物组织) R1050 厂家直销，提供OEM定制服务，大包装更优惠 

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保质期 ：一年

供应商 ：北京普利莱

保存条件 ：-20℃

规格 ：50次/100次

植物RNA提取试剂盒（适用含高多糖多酚植物组织）      R1050

描述：一些植物组织富含多糖、多酚、次级代谢产物，在细胞裂解后可与RNA紧密结合形成难溶的胶冻状沉淀导致提取失败，明显抑制下游RNA反应如逆转录和PCR等。植物RNA提取试剂盒组提供了卓越的植物RNA分离方案。首先，Lysis Solution采用复合型强变性剂和裂解剂能够裂解坚硬的植物组织，并完全抑制RNA酶活性；同时，Lysis Solution独特的内在成分既能抑制多酚氧化，又能最大限度地结合植物多糖和多酚以及次生代谢产物。其次，强烈的有机抽提步骤可进一步灭活RNA酶，去除蛋白质和基因组DNA污染，并进一步去除植物多糖和多酚以及次生代谢产物。随后，任何残留的多糖和多酚可进一步被Plant RNA Aid结合，并通过离心去除。RNA提取可在60分钟内完成，所提取的RNA纯度极高，完全不含DNA和多糖污染，可用于构建cDNA文库、RT-PCR、Northern转印分析、Poly(A) mRNA纯化、体外翻译、和RNA酶保护实验。由于动物肝脏和肌肉等组织富含糖原，此植物RNA提取试剂盒也特别适用从动物肝脏或肌肉组织提取高纯度的总RNA。
组成：
(1) Lysis Solution: 50 ml，用于植物组织裂解、分离RNA、去除植物多糖和多酚；
(2) Extraction Reagent: 50 ml，用于有机抽提去除蛋白质、DNA、多糖和多酚；
(3) Plant RNA Aid: 5 ml，用于完全去除植物多糖多酚和次生代谢产物。
适用范围：各种植物组织如叶片、根茎、种子组织。富含多糖糖原的动物肝脏肌肉组织。每0.5 ml Plant RNA Reagent可裂解50~150 mg植物组织，或5 ´ 10⁶个植物培养细胞。
储存条件: 4 ^oC密封避光保存1年有效
用户实验用品和操作准备：
极微量RNA酶都会导致RNA降解。分离RNA时RNA酶污染主要来自以下五个方面：(1) 实验人员的双手。(2) 器皿、吸头离心管、自备液体。(3) 组织细胞破碎不可避免地释放内源RNA酶。(4) RNA未能完全与蛋白质分离。(5) RNA沉淀和溶解后来自吸头离心管和溶液。Lysis Solution可完全抑制RNA酶活性，Extraction Reagent灭活并在离心步骤完全清除RNA酶。二者的结合使得RNA酶不再成为问题。因此使用高压消毒20分钟的吸头离心管和溶液即可胜任RNA提取操作。然而在RNA溶解之后，来自实验材料的RNA酶污染将会导致RNA降解，应严格使用高压灭活RNA酶的用品。戴手套无疑是有益的，但戴口罩和帽子则无必要。只要严格按照本指南准备和操作，使用Plant RNA Kit总是能获得高纯度RNA。

1. 固体组织破碎设备。可用下列装置之一：1)玻璃匀浆器。泡酸清洁，用高压灭菌蒸馏水洗涤数次。2)研钵。适用于液氮冻存组织的研磨，清洗方法同玻璃匀浆器。3)高速机械匀浆器(Polytron，Tekmar或类似产品)，打开开关，在蒸馏水中清洗分散器头数次。
2. 高压蒸汽30分钟消毒一次性吸头离心管。RNA沉淀溶解之后，应严格使用高压消毒的一次性用品。然而Plant RNAtrip能在RNA酶污染环境下工作，在裂解步骤可使用未高压但洁净的一次性吸头和离心管，但仅推荐在紧急情况下这样做。
3. 普通双蒸水，高压消毒20分钟。用于冲洗器皿，配制琼脂糖凝胶和电泳用缓冲液。DEPC处理的双蒸水。加DEPC到水中至终浓度为0.01% v/v，室温过夜，高压消毒30分钟。用于溶解RNA，配制TE缓冲液和75％乙醇。
4. 湿冰。在冰上进行操作有助于减少RNA降解。
5. 其它用品。电泳槽，双蒸水冲洗。离心机和加样器，无需处理。
6. 戴手套。注意某些实验如提取质粒DNA使用大量RNA酶，为防污染，须全面仔细清洗实验器具和实验区域。

RNA提取程序： 

1. 植物组织细胞破碎裂解

冰上操作。立即并快速破碎组织至关重要。初始组织细胞过量不仅使RNA得率下降，还将导致DNA和蛋白质污染。
1．1植物组织破碎与裂解
确定组织用量：推荐按比例每50~150 mg新鲜植物组织加0.5 ml Lysis Solution，但植物组织用量的上限变化甚大。(1)某些新鲜植物组织含水量甚高，而较干燥的植物组织50mg可能已经接近上限。为获足量RNA必须测试加入每种组织的量。注意使用过量的组织将导致提取失败。(2) 软组织、叶片、花、多汁组织、发芽种子等可直接加入Lysis Solution研磨破碎，而坚硬的植物组织如种子、木质茎干等最好先在液氮中研磨破碎为粉末。
按比例每50-150 mg植物组织加0.5 ml Lysis Solution，按下列方法之一裂解组织。(1) 研钵：适用于液氮冻存组织。将液氮冻存组织研成粉末，加0.5 ml Lysis Solution，继续研磨组织至完全破碎也可转移到玻璃匀浆器继续研磨。(2) 玻璃匀浆器：放入剪碎的新鲜植物组织，加入0.5 ml Lysis Solution，放置冰上，上下手动匀浆组织10-20次。(3) 内切式高速机械匀浆器：将植物组织放入塑料或玻璃试管内，试管置冰浴烧杯中，加入0.5 ml Lysis Solution，将内切式分散器头插入管内溶液中间并与组织块接触，转速12,000-20,000 rpm，缓慢上下移动试管10-20次，直到大部分组织打散。注意：少量难以打碎的组织碎片不影响后续RNA提取。用研钵和玻璃匀浆器匀浆组织时应略微多加一些裂解液，以补充裂解产物粘在器皿壁上造成的体积丢失。破碎组织用玻璃匀浆器可能比液氮研磨方便。
1．2植物培养细胞的破碎与裂解
弃培养基，收集细胞。每1-5 ´ 10⁶个细胞加0.5 ml Lysis Solution，须有效地覆盖瓶皿的细胞表面。晃动或用吸头吹打使提取液流过并裂解所有细胞。置冰上10分钟，倾斜瓶皿使粘稠的裂解物聚于一处以便取出。

1. 将裂解产物转移到1.5 ml离心管，置冰上20-30分钟。注意：富含多糖 和多酚的植物组织可延长孵育时间至30-60分钟。
2. 12,000 ´ g 4 ^oC 离心10分钟。取上清液转移到新管。注意：组织纤维碎片、植物多糖和多酚等沉淀在管底。大部分基因组DNA也在管底形成疏松粘稠的团状物。取上清液时如吸入少量拉丝状DNA粘稠物，不影响后续实验。
3. 加入0.5 ml Extraction Reagent，充分颠倒混匀，冰上孵育10分钟。
4. 离心12,000 ´ g 4 ^oC 10分钟，溶液分为两相。RNA在上层水相，下层为有机相，两相界面是一层薄膜，其厚度与组织细胞类型和多少有关。小心吸出水相转移到新离心管。注意：取上清液时应保留0.5-1 mm厚的水相，以免扰动和吸入下面的碎片和有机相。如果吸入，应将所取的上清液放回管中并重新离心10分钟，再次吸取水相。这一点至关重要，违背此原则容易导致RNA降解和DNA污染。
5. 优化步骤：对多糖含量特别丰富的植物，加入上清液1/10体积(50~70ml)的Plant RNA Aid (如有沉淀，用前轻摇重悬)到上清液，混匀，冰上孵育20分钟以进一步结合植物多糖和多酚，溶液将会变浑浊。离心12,000 ´ g 4 ^oC 10分钟。小心吸出上层水相转移到新离心管，勿扰动和吸入下面的透明胶冻状沉淀。注意：完全去除植物多糖至关重要，否则将明显降低RNA回收率，并使沉淀呈难溶解的胶冻状。
6. 将步骤5或6获得的上清液约500 ml转移到新管，加入0.7~1体积的异丙醇混匀。冰育5-10分钟已足以沉淀RNA。用更低的温度和更长的时间进行沉淀仅在组织极少时有用。
7. 10,000´g 4 ^oC 离心10分钟。管底可见少许RNA沉淀。注意：如初始组织细胞量少，RNA将附着在管壁，用肉眼几乎难辨沉淀，但不影响实验。如RNA 沉淀量很多并呈胶冻状，通常表明有多糖、多酚和蛋白污染。应仔细检查操作步骤。一个补救措施是用Lysis Solution溶解沉淀，从步骤1开始重新抽提沉淀。
8. 弃上清。立即加入1 ml 75%乙醇，颠倒混匀数次洗涤沉淀。12,000 ´ g离心5分钟。弃上清，尽量完全吸去管壁上的液体。注意：乙醇洗涤后RNA沉淀容易漂浮，勿倒掉或吸走RNA沉淀。RNA沉淀在75%乙醇中可在4 ^oC保存一周或在－20 ^oC保存一年。
9. 敞开管口空气干燥5-10分钟使残留液体挥发，RNA略微沉淀干燥即可。用50-100 ml自备的DEPC处理的高压消毒纯水溶解沉淀。RNA溶液可保存于－70 ^oC或液氮中。注意：过分干燥将使RNA难以溶解。55 ^oC加热或反复冻融数次可以助溶。RNA溶液加3倍体积乙醇冻存于－20 ^oC，用时离心沉淀。

说明

1. 测定OD值，根据OD260计算RNA浓度。OD260/280比值可初步判断RNA质量，比值在1.6-2.0之间均属正常。起始组织量过大，或吸取了有机相或碎片，将使RNA样品中蛋白和杂质含量高，RNA沉淀乙醇洗涤不充分(步骤8)，均可导致OD260/280比值降低。但切记OD260/280比值还受很多非质量因素的影响。例如，RNA用水溶解或pH偏酸OD260/280偏低，用TE或离子强度较高的溶液溶解时较高，但均不影响RNA后续使用。切记即便是已降解的RNA，OD260/280比值也能达到看似完美的2.0左右，因此该比值并非判断RNA降解与否最佳的指标。判断RNA质量的最佳途径是进行普通RNA琼脂糖电泳检查RNA完整性。
2. 检查RNA完整性。取1 mg RNA样品，加5ml 纯水加1ml上样缓冲液进行1%普通琼脂糖凝胶电泳。溴化乙锭染色，紫外灯观察。
3. 勿直接接触皮肤和吸入。如接触皮肤，立即用大量水清洗。京普利莱基因技术有限公司坐落在北京中关村高新技术园区，由数名具有精深的学术研究能力和产品开发经验的留美博士创建，先后获得国家及中关村高新技术企业认证，依靠世界领先的技术和理念为支撑，致力于打造生命科学研究领域高品质生物试剂产品和技术服务，成为有国际影响力的、对生命科学研究和人类健康有巨大推动作用的生物技术公司。
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