印度HiMedia 叶酸测定用培养基

库存 ：50

英文名 ：Folic Acid Casei Medium

保质期 ：3年

供应商 ：深圳子科生物科技有限公司

保存条件 ：2-8℃

 货品名称：叶酸测定用培养基

   英文名：Folic Acid Casei Medium

   品牌：印度HiMedia

   货号：M126

   品牌：HiMedia

   用途：叶酸的微生物法测定

原理
叶酸测定用培养基（又名叶酸干酪培养基）采用鼠李糖乳杆菌（ATCC 7469）为测定用菌，用于叶酸的微生物法测定。该培养基是基于Flynn等人(1)的配方，并经Baker等人(2)和Waters、Mollin(3)改良。用于维生素测定的培养基通常需要三种：维持培养基、接种培养基和测定用培养基。后者通常是化学限定的培养基，包含所有测定菌生长所需的养分，但不含有待测的分子。类似的，叶酸干酪培养基包含鼠李糖乳杆菌生长所需的所有成分，但不包含叶酸。因而，添加一系列浓度增加的叶酸，会观察到鼠李糖乳杆菌生长的递增。

叶酸标准品的制备：将20mg叶酸干粉溶于含有20ml乙醇的100ml蒸馏水中。用0.1N NaOH调整溶液pH值为10.0，再用0.05N HCl调pH为 7.0。该溶液含有200mg叶酸/ml。用999ml蒸馏水稀释1ml该溶液，则浓度为200ng/ml。再用999ml叶酸缓冲液A（货号M544）稀释1ml该溶液，则为0.2ng/ml的叶酸标准溶液。每管取0,0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0和5ml该溶液，配置即告完成。

样本叶酸浓度的测定步骤：如前所述使用0.5,1.0,1.5ml或其他体积的制备好的血清提取物。加入5ml叶酸干酪培养基和足量的蒸馏水，使每个试管的总体积为10ml。15磅121°C灭菌5分钟。冷却试管并向每个试管中加入一滴接种液。35-37℃孵育18-24小时后进行浊度读数。读数前将试管冷藏15-30分钟以停止细菌生长。620nm检测吸光度。待测样品中的叶酸含量应根据标准曲线来确定，不过要考虑样品稀释度。

质量控制
1、外观——米黄色至黄色均一自由流动粉末
2、制备好的培养基颜色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有轻微沉淀
3、配比浓度——在25°C下9.4%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值为6.7±0.1
4、pH值——6.60-6.80

配置
称取9.4g干粉培养基溶于100ml蒸馏水，加入50mg抗坏血酸。加热至沸腾使培养基完全溶解。测定时，分装至每管为5ml培养基（包含标准品和待测样品）。加蒸馏水，使总体积达到10ml。高压消毒15磅121°C 5分钟。立即冷却。

培养反应
采用鼠李糖乳杆菌（ATCC 7469）进行叶酸的微生物法测定。35-37°C孵育16-18小时。

生长状况
可获得良好的生长。随着测定管叶酸标准品浓度升高（即 0, 0.1,0.2, 0.4, 0.6, 0.8,1ng），鼠李糖乳杆菌生长逐渐递增，伴随着620nm处吸光度的增加。

 
参考文献
1. Flynn,Williams, ODell and Hogan, 1951, Anal. Chem., 23, 180.

2. Baker, Herbert,Frank, Pasher, Hunter, Wasserman and Sobotka, 1959,Clin. Chem., 5, 275.

3. Waters and Mollin,1961, J. Clin. Path., 14, 335.