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文献和实验
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库存 :2
保质期 :一年
保存条件 :-20℃
规格 :10×100ul
1. 取需转化质粒5µg,酶切,回收;2. 取一支无菌的1.5ml EP管,依次加入预冷的线性质粒1-5µg(体积不高于15 µl),酵母促转化剂10µl,100µl冰上融化的GS115感受态细胞,毕赤酵母转化液500µl,轻轻翻转混匀6-8次;
3. 30℃水浴30min,每10min轻轻翻转混匀6-8次;
4. 每支加入20µl的二甲基亚砜;
5. 42℃水浴15min,每5min轻轻翻转混匀6-8次;
6. 12000rpm瞬时离心弃上清,每支加1ml的YPGPlus(或YPG)于30℃复苏1h;
7. 12000rpm瞬时离心弃上清,用100µl 0.9%NaCl重悬,涂板,30℃ 培养48-96h。
注意事项:
1.使用酵母促转化剂前,请把装有酵母促转化剂的管子在沸水中煮沸5min,然后立即放在冰上,用后放在-20℃储存备用。
2.转化液低温环境下会析出,请于常温下完全溶解后使用。
3.化全程要无菌操作。
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