重组转甲状腺素蛋白/前白蛋白 蛋白质

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英文名 :Recombinant human TTR/Prealbumin Protein

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重组蛋白抗原制备常用的有原核表达系统、酵母表达系统、真核表达系统,真核表达系统主要有昆虫细胞-杆状病毒表达和哺乳动物细胞表达系统等。重组表达制备抗原一般会在蛋白序列加上一段用于纯化的标签,除了便于纯化还可以增加蛋白的可溶性和分子量更利于抗体制备,常用的标签主要有GST、6*His、Myc、MBP、Flag、Fc等。根据下游实验对蛋白质的使用需求,如有需要可以切除标签;如不切除,后期抗体在使用时如遇标签抗体干扰,可先用标签蛋白免疫吸附去除高免血清中针对标签的抗体。重组蛋白与天然蛋白相比,在构象、修饰和蛋白活性上还是有差距的,真核与原核相比,更接近于天然蛋白;这类抗原制备一般适合于Western Blot、IHC、ELISA以及免疫层析、胶体金和免疫比浊等诊断类抗体的制备,只不过制备的过程需要用含内源性蛋白标本进一步筛选验证。

抗原制备最为重要的环节就是抗原的纯化,通过重组蛋白制备抗原当然也不例外,在项目开始之前这个难度往往被忽视,科研人员往往认为既然在抗原设计的时候融合了纯化标签,纯化过程按照标准流程操作,得到高纯度抗原就是水到渠成,然而结果往往不如人意;诸如,明明带了标签的蛋白挂不上纯化柱子、洗脱下来的蛋白杂带比目的带还多、目的蛋白结合在柱子上洗脱不下来等等。蛋白纯化在业界都是一大难题,一个蛋白的纯化往往会用到几种方案和策略。根据福因德生物技术团队的经验,纯化出一个符合抗体制备要求的重组抗原蛋白至少要用2-3种手段,常用的手段有离子交换层析、标签亲和层析、凝胶过滤分离层析等等。

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