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库存 :现货
英文名 :Oligo dT-Coated Magnetic Beads
CAS号 :点击查看
保质期 :2年
供应商 :翌圣生物科技(上海)股份有限公司
保存条件 :4℃保存
规格 :1mL
产品描述Oligo dT 磁珠为表面包被有Oligo dT的1 μm磁性聚合物微球,具有单分散和磁响应性强等特点。磁珠通过Oligo dT与真核生物mRNA的poly A尾结构互补配对,快速高效从总RNA、细胞裂解物和带有poly A的体外转录RNA样本中分离纯化mRNA。纯化的mRNA可用于RT-PCR、cDNA文库构建、RACE、探针杂交和转录组测序等应用。产品性质
基质 | 聚合物磁珠 |
配体 | Oligo dT |
平均粒径 | 1 μm |
磁核 | Fe3O4 |
壳层 | 聚合物 |
磁性类型 | 超顺磁性 |
应用方向 | mRNA分离纯化 |
应用方式 | 手动/自动 |
dA30结合量 | >300 pmol/mg 磁珠 |
mRNA结合量 | ~2 μg/mg磁珠 |
磁珠浓度 | 10 mg/mL |
保存溶液 | PBS, pH 7.4, 0.05% Proclin-300 |
保存条件 | 4℃ |
保质期 | 2年 |
运输和保存方法冰袋运输。4℃储存,有效期2年。
注意事项1. 磁珠严禁冷冻,否则可能导致磁珠碎裂,影响mRNA 纯化效果。
2. 所有用于mRNA提取的buffer和耗材都应该是RNase-free,操作过程中应佩戴一次性手套和口罩避免RNase的污染。
3. 磁珠取用前应恢复至室温,且充分混匀。
4. 若总RNA样本降解严重,无法得到高质量的mRNA。
5. 磁珠用量相对于样本量不可过低,否则会导致mRNA回收率低和rRNA残留过高。
6. 磁吸时间不应少于1min,磁吸后吸弃上清液时避免损失磁珠。
7. 洗脱时可能存在磁珠残留,吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。
8. 提取到的mRNA最好立即用于RT-PCR。如果需要保存,建议将mRNA从磁珠上洗脱下来,可在洗脱液中添加RNase抑制剂,-80℃冻存。
实验前准备1. 自配试剂
试剂名称 | 组分 |
结合液 | 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 1.0 M LiCl, 2 mM EDTA |
洗涤液 | 10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.15 M LiCl, 1 mM EDTA |
洗脱液 | Nuclease-Free Water 或 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 |
2. 自备设备和耗材:磁性分离架,水浴锅或金属浴,冰浴,漩涡振荡器,旋转混合仪,1.5 mL离心管(RNase-free),微量移液器及吸头(RNase-free)。
3. 将磁珠恢复至室温,且充分重悬。
4. 设置水浴锅或金属浴为65℃。
操作方法以使用50 μL磁珠,从100 μg总RNA中纯化mRNA为例。可以根据样本用量按比例进行调整。
1. 使用DEPC水将100 μg总RNA的体积调整为100 μL。
注:若总RNA的浓度低于1 μg/μL,可增加样本体积,并调节步骤6的结合液用量和样本体积相同;或者直接使用100 μL样本,以下步骤不变。
2. 将上述总RNA样本于65℃变性处理5 min,立即置于冰浴。
3. 吸取50 μL均匀重悬并恢复至室温的Oligo dT磁珠于1.5 mL离心管(RNase-free),磁吸,吸弃保存液。
4. 使用100 μL结合液重悬磁珠,磁吸,吸弃上清液。
5. 重复步骤4。
6. 使用100 μL结合液重悬磁珠。
7. 将步骤2中处理好的总RNA样本加入磁悬液中,混匀,室温旋转混合10 min。
8. 磁吸,吸弃上清液。
9. 使用200 μL洗涤液重悬磁珠,磁吸,吸弃上清液。
10. 重复步骤9。
注:使用10 μL移液器吸头尽量吸弃上清液。
11. 加入20-100 μL洗脱液,吹打重悬磁珠,室温混匀5min,磁吸,将纯化的mRNA溶液转移至新的EP管(RNase-free)。
注:65℃-75℃加热洗脱,可增加洗脱效率。
检测分析
- 总RNA中mRNA的含量一般为1%-5%, 可以使用Nanodrop或Qubit测量纯化的mRNA浓度。
- 可以使用RT-qPCR或Agilent 2100 Bioanalyzer及配套的试剂检测rRNA残留情况。
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
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钻石会员
入驻年限:17年