AAVrh10 Titration ELISA

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库存 ：1000

供应商 ：PROGEN Biotechnik GmbH

规格 ：96 tests

AAV在基因治疗领域的应用及常用病毒滴度检测方法

AAV是细小病毒科的单链DNA缺陷型病毒，有12种血清型，通常需要辅助病毒（腺病毒、疱疹病毒等）的辅助才能完成复制和装配。基因组由反向末端重复序列（ITRs）、Rep和Cap基因组成。ITRs是病毒包装复制的起点，Rep是编码病毒复制和整合蛋白的基因，Cap编码衣壳蛋白的基因。
重组AAV（rAAV）在野生AAV基础上进行改造，衣壳仍然使用野生型序列，但基因组中的Rep和Cap基因被引入的目的基所替代，仅保留ITRs和包装信号序列，因此rAAV在极大程度上降低了免疫原性、提高了安全性、是基因治疗的主要载体。

rAAV在基因治疗应用中的优点：

1. 非致病性，安全性高
2. 基因表达持续时间长
3. 低细胞毒性，低免疫原性
4. 不易整合到基因组，基因自发突变低
5. 能够感染多数组织和细胞

不同血清型的组织靶向性
非致病型病毒，安全性高
基因表达持续时间较长

重组腺相关病毒(rAAV)载体是一种十分有前景的治疗方法。然而作为治疗型载体，潜在免疫毒性是研发转化为临床应用要解决的首要问题，这种免疫毒性以机体产生针对AAV衣壳抗原不良免疫反应的形式存在，而产生的原因可能是因空衣壳病毒缺少目的基因所致。因此在临床应用中，准确地定量AAV基因组滴度、感染滴度、AAV衣壳总滴度对降低免疫原性、提高安全性和有效性十分重要。


常用的AAV滴度检测方法
常用的方法包括：ELISA、qPCR、ddPCR、细胞转导、血小板测定、斑点印记、电子显微等技术。
不同检测方法检测的参数不同，例如：qPCR、ddPCR检测的是AAV基因组滴度，也称物理滴度；细胞转导法检测的是病毒感染滴度，也称功能滴度；电镜技术检测的是空衣壳与完整衣壳的比率；ELISA和斑点杂交法测定的是完整病毒颗粒（空衣壳和完整衣壳）的浓度，但斑点杂交法是半定量法，不能对衣壳滴度进行准确定量。qPCR、ddPCR操作简单快速，可实现高通量检测，但在样品处理、标准品稀释、引物设计、引物结合、PCR扩增等过程中容易产生数据差异，低温电镜检测不适用于AAV绝对定量，且设备昂贵、样品前处理复杂、检测时也容易出现伪影致使实验结果不准确。因此，比较推荐是PCR（qPCR或ddPCR）结合ELISA法，分别检测含病毒DNA的衣壳滴度和总衣壳滴度，通过计算获得空壳与全病毒的比率。

不同检测方法在检测参数、准确度和数据差异上的比较

检测方法	检测参数	滴度描述	感染滴度	DNA滴度	衣壳滴度	准确度	数据差异
ELISA	总衣壳滴度（完整衣壳&空衣壳）	完整病毒颗粒浓度（完整衣壳和空衣壳）			√	高	小
qPCR	AAV DNA滴度	含病毒DNA的衣壳浓度		√		中等	大
ddPCR	AAV DNA滴度	含病毒DNA的衣壳浓度		√		中等偏上	中等
细胞转导检测	AAV感染滴度	转导细胞的病毒颗粒浓度	√
斑点印记	总衣壳滴度（完整衣壳&空衣壳）	所有病毒颗粒浓度（完整衣壳和空衣壳）			√	中等	中等
电子显微技术	空衣壳与完整衣壳比率	空衣壳与完整衣壳的比率计算			√	低	/

Progen AAV滴度检测试剂，基于夹心ELISA法，使用生物素标记的抗体捕获样本中的AAV病毒，通过显色法，定量检测AAV病毒滴度，产品因其操作简单、定量准确、质量稳定被基因治疗研究客户高度认可。

北京百普洛科技有限公司是PROGEN在中国的授权代理商，以提供优质的产品和完善的服务为使命，依托PROGEN在生命科学和基因治疗领域的强大专业背景，自成立以来已经为国内140多家基因治疗研发企业提供了高质量产品。