Gibson无缝连接试剂盒发布啦！Epi™ 2×HiFi Gibson Assemble Mix Kit

Gibson组装是一种等温无缝克隆方法，能够高效的组装多个DNA片段，将一个或多个插入片段定向、快速、准确地插入到线性化载体中，最终构建的重组克隆无任何额外的碱基序列残留。利用表观生物Epi™ 2×HiFi Gibson Assemble Mix kit，可实现高保真、高稳定性、高效、简便的DNA连接效果，适用于大量文库构建、蛋白表达等场景。
 

• DNA连接

• 分子克隆

• 蛋白表达

• 定点突变

• 小基因组组装

• 高保真性：克隆准确率 >95%，所见即所得
• 高稳定性：液态的 Mix,避免反复冻融，避免酶活损失
• 高效：克隆数目多，可用于大容量文库的构建
• 简便：Mix 和样品等体积混匀即可
  
  
   
  ▲ 试剂盒组成
   
  
   
   
  ▲ 规格与价格
   
  
   

  ▲ 技术原理

  Gibso 组装没有酶切位点的限制，线性化载体可通过限制性内切酶酶切或通过 PCR 的方法直接制备，在插入片段的两个 PCR 引物的 5' 端引入与载体克隆位点两端完全相同 15~25bp 的重叠序列充当同源臂。带有同源臂的插入片段和线性化载体按一定比例混合后，在重组酶的催化下，50℃反应 10 - 20min 即可转化。

  
  
   
  图 1. Gibson 组装原理示意图。A.Giboson 组装中的三种酶具体工作原理。B. 单个插入片段组装。C. 多个插入片段组装。彩色区块为同源臂，退火温度要高于 48℃。Gibson 组装的反应体系包含 T5 核酸外切酶，高保真 DNA 聚合酶，和 Taq DNA 连接酶。T5 核酸外切酶具有很强的 5' → 3' 的核酸外切酶活性，酶切克隆片段产生 3' 端突出的粘性末端，同源末端之间会进行碱基互补配对，随后高保真 DNA 聚合酶按照 5' → 3' 方向填补间隙。Taq DNA 连接酶在缺刻处将 5' 磷酸和 3' 羟基连成磷酸二酯键。
  
  
  
  ▲ 表观生物实测数据
  
   
  图 2. 本试剂盒实测效果。A. 反应产物转化感受态细菌 DH5α 后涂布 LB 平板效果图。单个 800 bp 的插入片段，800 bp 和 500 bp 等多片段插入。B. 菌落 PCR 鉴定重组克隆，全部为阳性。

  
   

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