pCMV-N-mito-Flag-APEX2 (线粒体邻近蛋白生物素标记质粒)

规格 ：100μg

APEX

APEX (Ascorbate Peroxidase)，中文名为抗坏血酸过氧化物酶，是基于来源于豌豆(pea)或大豆(soybean)的抗坏血酸酶经工程改造而来。在H₂O₂存在的情况下，APEX能快速将生物素基酪氨酰胺(Biotin-tyramide，Biotin-phenol)、生物素-4-氨基·苯酚(Biotin-4-aminophenol)或生物素-萘胺(Biotin-Naphthylamine, Biotin-Nap)转化为自由基，这些自由基可以标记20nm半径内无论是直接相互作用的蛋白还是邻近的蛋白任意暴露在外富含电子的氨基酸残基(Tyr, Trp, Cys or His)，后续可通过Streptavidin磁珠或凝胶从细胞裂解液中分离纯化生物素标记蛋白，并通过质谱鉴定相互作用的蛋白。此外，APEX也常被用于电子显微镜细胞成像(Electron Microscopy, EM)，因此也被称作EM标签(EM tag)，其原理是表达APEX融合蛋白的细胞被固定后，加入DAB (3, 3'-diaminobenzidine)底物，在H₂O₂存在的情况下，APEX催化DAB氧化聚合交联生成局部沉淀，后续用富含密集电子的OsO₄对DAB聚合物进行染色产生EM对比，后续用电子显微镜进行成像。

APEX2是APEX的改进增强版本。APEX2和APEX相比的优点有：①蛋白表达量高：APEX2在哺乳细胞中稳定性更好，因此融合蛋白表达量更高。②酶活性更高：APEX2的酶活性更高，因此可以在融合蛋白表达量较低的情况下更有效的进行邻近蛋白生物素标记和电子显微镜细胞成像。

碧云天基于APEX2生产了pCMV-N-NES-Flag-APEX2 (邻近蛋白生物素标记质粒)和pCMV-N-mito-Flag-APEX2 (线粒体邻近蛋白生物素标记质粒)供大家选择。

pCMV-N-NES-Flag-APEX2 (邻近蛋白生物素标记质粒)是碧云天自行研发生产的一种用于在哺乳动物细胞中表达N端融合核外运信号(Nuclear export signal, NES)、Flag标签和APEX2的目的蛋白以用于生物素标记与其相互作用的目的蛋白的质粒。在H₂O₂存在的情况下，APEX2在1分钟内能快速将生物素基酪氨酰胺、生物素-4-氨基·苯酚或生物素-萘胺转化为自由基，这些自由基可以标记20nm半径内无论是直接相互作用的蛋白还是邻近的蛋白任意暴露在外富含电子的氨基酸残基(Tyr, Trp, Cys or His)，后续可通过Streptavidin磁珠或凝胶从细胞裂解液中分离纯化生物素标记蛋白，并通过质谱鉴定相互作用的蛋白(图2)。

pCMV-N-mito-Flag-APEX2 (线粒体邻近蛋白生物素标记质粒)是碧云天自行研发生产的一种用于在哺乳动物细胞中表达N端融合线粒体基质定位肽(Mitochondrial matrix target peptide, mito)、Flag标签和APEX2的目的蛋白以用于生物素标记与其相互作用的目的蛋白的质粒。其具体工作原理参考pCMV-N-NES-Flag-APEX2的工作原理。线粒体邻近蛋白生物素标记质粒在筛选和鉴定线粒体内的蛋白与蛋白相互作用和探索相关功能方面发挥着至关重要的作用。

图2. 碧云天邻近蛋白生物素标记质粒pCMV-N-NES-Flag-APEX2的工作原理图。