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库存 ：现货
英文名 ：复制型慢病毒(RCL)检测试剂盒
CAS号 ：点击查看
保质期 ：2年
供应商 ：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
保存条件 ：-20度
规格 ：50T
产品描述复制型慢病毒(RCL)检测试剂盒是用于定量分析检测各种使用慢病毒载体相关的细胞产品中可能发生的复制型慢病毒的潜在风险。
本试剂盒针对慢病毒的包膜蛋白VSV-G基因序列设计特异性引物，采用qPCR荧光探针原理，专一快速的检测复制型慢病毒RCL风险情况，其最低检测限可以达到1 copies/μL水平，且配套有RCL DNA Control（DNA定量参考品）。该试剂盒需要与本公司的磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒(Cat#18461ES/18462ES)配套使用。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | |
| 41311ES50 (50T) | 41311ES60 (100T) | ||
| 41311-A | RCL qPCR Mix | 0.75 mL | 1.5 mL |
| 41311-B | RCL Primer&probe Mix | 200 μL | 400 μL |
| 41311-C | DNA Dilution Buffer | 2×1.8 mL | 4×1.8 mL |
| 41311-D | RCL DNA Control (5×108 copies/μL) | 25 μL | 50 μL |
| 41311-E | IC | 50 μL | 100 μL |
1. IC：Internal control，内部对照。
运输和保存方法
1. 所有组分均干冰运输，-20℃保存，有效期2年。且41311-A和41311-B均需避光保存。
2. 收到货后，请检查共5个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。
注意事项
1. 使用本试剂前请仔细阅读本说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。
2. 每个组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4. 本产品仅作科研用途。
适用机型
包含但不限于以下仪器：
Bio-Rad：CFX96 Optic Module；
Thermo Scientific：ABI 7500，ABI Quant Studio 5，ABI Step OnePlus；
上海宏石医疗科技：SLAN-96S。
使用方法
一、RCL DNA定量参考品的稀释和标准曲线的制备
用试剂盒中提供的DNA Dilution Buffer（DNA稀释液）将RCL DNA Control定量参考品进行梯度稀释。
具体操作如下：
1. 将试剂盒中的RCL DNA Control和DNA Dilution Buffer置于冰上融化，待完全融化后，轻微振荡混匀，低速离心10 sec。
2. 取7支干净的1.5 mL离心管，分别标记为Std0，Std1，Std2，Std3，Std4，Std5，Std6。
3. 在标记为Std0的1.5 mL离心管中加90 μL DNA Dilution Buffer和10 μL RCL DNA Control (5×108 copies/μL)，即稀释为5×107 copies/μL，振荡混匀后短暂快速离心10 s，该浓度可分装置于-20℃短期保存（不超过3个月），使用时避免反复冻融。
4. 在Std1，Std2，Std3，Std4，Std5，Std6管中先分别加入90 μL DNA Dilution Buffer，再进行梯度稀释，稀释方法如下：
| 稀释管 | 稀释比例 | 终浓度 |
| Std1 | 10 μL Std0 + 90 μL DNA Dilution Buffer | 5×106 copies/μL |
| Std2 | 10 μL Std1 + 90 μL DNA Dilution Buffer | 5×105 copies/μL |
| Std3 | 10 μL Std2 + 90 μL DNA Dilution Buffer | 5×104 copies/μL |
| Std4 | 10 μL Std3 + 90 μL DNA Dilution Buffer | 5×103 copies/μL |
| Std5 | 10 μL Std4 + 90 μL DNA Dilution Buffer | 5×102 copies/μL |
| Std6 | 10 μL Std5 + 90 μL DNA Dilution Buffer | 5×101 copies/μL |
1. 每个浓度做3个重复孔，该试剂可测试5×101 copies/μL-5×106 copies/μL线性范围。若需要，可适当扩大或缩小线性范围。
2. 为减少反复冻融次数和避免污染，建议初次使用时将DNA定量参考品分装储存于-20℃。
3. 已融化未使用的DNA Dilution Buffer可保存于2-8℃ 7天，若长时间不用，请放置于-20℃。
4. 为确保模板完全混匀，每个梯度稀释时需轻微震荡混匀约1 min。
二、样本加标回收质控ERC的制备
根据需要设置ERC中的RCL DNA标准品浓度（以制备加5×104 copies RCL DNA量的ERC为例），具体操作如下：
1. 取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，再加入10 μL Std4，混匀，标记为ERC。
2. 加标回收ERC和同批待测样本一起进行样本前处理，制备加标回收ERC纯化液。
三、阴性抽提质控NCS的制备
根据实验设置阴性抽提质控NCS，具体操作如下：
1. 取100 μL样本基质溶液（或DNA Dilution Buffer）加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为NCS。
2. 阴性质控NCS和同批待测样本一起进行样本前处理，制备成阴性质控NCS纯化液。
四、无模板对照NTC的制备
根据实验设置无模板对照NTC，具体操作如下：
1. 无模板对照NTC无需进行样本前处理，在qPCR法检测RCL DNA含量阶段开始配置即可。
2. 每管或孔中的NTC反应体系为20 μL Mix混合液（即15 μL RCL qPCR Mix + 4μL RCL Primer&Probe Mix+ 1μL IC）+ 10 μL DNA Dilution Buffer，建议配置3个重复孔的量。
五、反应体系
| 组分 | 体积（μL） |
| RCL qPCR mix | 15 |
| RCL Primer&probe mix | 4 |
| IC | 1 |
| DNA template | 10 |
| 总体积 | 30 |
1.根据反应孔数计算本次所需的Mix混合液总量：Mix混合液=（反应孔数+2）× (15+4+1) μL（含有2孔的损失量）。通常，每个样本做3个重复孔。
2. 反应孔数=（6个浓度梯度的标准曲线+1个无模板对照NTC+1个阴性抽提质控NCS+待测样TS个数+待测样本对应加标回收ERC个数）× 3。
NTC (No Template Control)：DNA Dilution Buffer
NCS (Negative Control Solution)：样本基质溶液或DNA Dilution Buffer进行样本前处理后，所得纯化液为NCS
TS (Test Sample)：待测样本
ERC (Extraction Recovery Control)：待测样本中加入如5×104 copies标准品DNA后进行样本前处理，所得纯化液为加标回收ERC
3. 加样完成密封好管子后，请低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，再震荡混匀5 sec以上，完全混匀反应液，再低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，如有气泡，需将气泡排尽。
下图为参考板位：
该示例是对RCL复制型慢病毒的qPCR法检测操作的展示，检测样本包括：6个浓度梯度的RCL DNA标准曲线、1个无模板对照NTC、1个阴性质控NCS、3个待测样本TS、3个样本加标回收ERC。建议每个样本做3个重复孔。
六、扩增程序参数设置（两步法）（以ABI公司7500 qPCR仪、软件版本2.0为例）
1.创建空白新程序，选择绝对定量检测模板。
2.创建1个检测探针，命名为“RCL-DNA”，选择报告荧光基团为“FAM”，猝灭荧光基团为“none”；再创建1个检测探针，命名为“IC”，选择报告荧光基团为“CY5”，猝灭荧光基团为“none”。参比荧光为ROX”（参比荧光可根据仪器型号等情况，选择是否需要添加）。
3.在“Assign target (s) to the selected wells”面板中，将标准曲线孔的“Task”一栏设置为“Standard”，并且在“Quantity”一栏分别赋值为“5000000”，“500000”，“50000”，“5000”，“500”，“50”（含义为每孔的DNA浓度，单位为copies/μL），并且在相应的“sample name”一栏中命名为“
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