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文献和实验
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库存 :2000
供应商 :上海白益生物科技有限公司
现货状态 :2-3周
保修期 :详询
规格 :200支/盒,10盒/箱
"生物耗材裂解液的制备
A. 制备细胞裂解液:
①收集胰蛋白酶消化的细胞并离心,用PBS清洗。
②用100μl RIPA缓冲液冰浴溶解沉淀10min(每500000个细胞20μl RIPA缓冲液)。
③10000rpm,4℃离心10min,取上清转移至新管。
④用考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度。
⑤用裂解缓冲液将溶液浓度调到5mg/ml,每小瓶中放100μl,-80℃储存。
⑥按照1:1体积比混合2×样品缓冲液,煮沸5min后,室温放置5min.
⑦短时离心后点样电泳检测。
B. 制备组织裂解液:
①在制备过程中一直将溶胞液或组织放在冰上。
②切开组织,称取组织1.5g于PBS中清洗。
③在RIPA缓冲液中剪碎组织后,转移到匀浆器中,加足5ml RIPA缓冲液,研磨20min.
④将研磨液转移到1.5ml的离心管中,14000rpm,4℃离心10min.
⑤取上清液作为完整的组织裂解液。
⑥用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度。
⑦用裂解缓冲液将溶液浓度调到5mg/ml,每小瓶中放100μl,-80℃储存。
⑧按照1:1体积比混合2×样品缓冲液,煮沸5min后,室温放置5min.
⑨短时离心后点样电泳检测。
RIPA裂解液
RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液,获得的蛋白样品可用于常规WB、IP等实验。
组分:25 mM Tris-HCl, pH 7.6、150 mM NaCl、1% NP-40、1%去氧胆酸钠、0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)。
IP裂解液
IP裂解液是一种改良后的RIPA裂解液,具中等强度效力,可高效溶解细胞蛋白,但不会像RIPA一样释放染色体组DNA或破坏蛋白复合物。适合下游免疫沉淀或亲和吸附应用。
组分:25 mM Tris-HCl, pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、1% mM EDTA、5% 甘油。
NP-40裂解液
NP-40裂解液是一种很温和的非离子型去垢剂,与蛋白结合力强,尤其适用于膜蛋白非变性条件下的溶解。
组分:50mM Tris-HCl pH 8.0、150mM氯化钠、1%NP-40;加蛋白酶抑制剂:抑肽酶、亮肽素、胃抑素,每种1μg / ml;使用前立即添加1mM PMSF。
Tris-Triton裂解液
Tris-Triton裂解液是非离子型表面活性剂,效力介于NP-40和SDS之间,下游应用有WB、ELISA、IP。
组分:10mM,pH值7.4、100mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1% Triton X-100、10% 甘油、0.1% SDS、0.5% 去氧胆酸钠。
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