Tunel凋亡实验

服务名称 ：Tunel凋亡实验

提供商 ：上海威奥生物

Tunel原理：
凋亡的一个特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或 DNA 被切割，出现单链或双链缺口，并产生与 DNA 断点数目相同的 3’-OH 末端，地高芯标记的 dUTP （ DIG-dUTP）标记至 3’-OH 末端，与生物标记的抗地高芯抗体（ Anti-DIG-Biotin）反应后，再结合链酶亲和素-过氧化物酶（ SABC），然后加入显色底物 DAB 予以显示。

实验流程：

1.样品处理；

（1）细胞涂片和冰冻切片：

（2）组织：

2.灭活；

3.消化；

4.  标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer) 、TdT和、DIG-d-UTP ；

5.TBS 洗涤；

6.加封闭液 ；

7.加入生物素化抗地高芯抗体；

8. 加入 SABC；

9. DAB 显色；

10. 苏木素轻度复染、脱水、封片、显微镜观察。
注意事项：

1、未打开的试剂盒贮存在－20℃（－15～25℃），一旦解冻， 以后就保存在4℃（2～8℃）下，避免反复冻融。

2、初次检测细胞凋亡，最好设置阳性和阴性对照片。

3、血细胞含量高的组织，尽可能延长过氧化氢的灭活时间。

4、使用新鲜的H2O2溶液，孵育后立即将标本放入PBS清洗  （H2O2可导致DNA损伤）

5、假阳性高是TUNEL检测的一个主要缺点。观察TUNEL阳性片是应对照HE切片。结合细胞HE染色来判断阳性的细胞 究竟是假阳性还是真正发生了凋