组织DNA提取试剂盒

操作步骤：

1、 请自行准备：无水乙醇、异丙醇、1.5mL 离心管，生理盐水。

2、 取出洗涤液，按终浓度 70%比例加入无水乙醇， 3mL 加入 7mL 无水乙醇，9mL 加入 21mL 无水乙醇，充分混匀。

3、 取 10-20mg 左右的组织，用液氮研磨为粉末，转入 1.5mL 离心管内，加入 100 μL 生理盐水，振荡 15 秒（或直接在 100 μL 生理盐水中将组织匀浆为细胞悬液），加入 200 μL 裂解液， 20 μL 复合消化液，充分混匀，65℃温育 12 分钟（如组织匀浆不充分，可适当延长消化时间至组织完全消化）。

[如需除去 RNA，可在加入裂解液后先加入 20μL  DNase –Free RNaseA(货号：abs60326)，振荡混匀，室温放置 5 分钟。再加入 20μL复合消化液，振荡混匀，65℃水浴 12 分钟。]

4、 加入 200μL 异丙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响 DNA 的提取与后续实验。

5、将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。

6、 按每份样本 50μL 取洗脱液（如 10 份提取样本，即取 500μL 洗脱液），放置于灭菌 1.5mL 离心管，65℃预热。

7、 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液至吸附柱内，静置 2 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。

8、 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液至吸附柱内，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。

9、将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 离心 2 分钟，离去残留的洗涤液。

10、 取出吸附柱，放入新的 1.5 mL 离心管内，加入 50μL 洗脱液，静置 2 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟，收集 DNA 溶液。提取的 DNA 即可用于下一步实验或-20℃保存。
 

注意事项：

1、组织在提取前应匀浆充分，如无法充分匀浆，应延长消化时间至组织完全消化，直至肉眼无可见的组织块 。

2、 使用本试剂盒，动物组织取样量不要超过 25 mg；小鼠尾巴不超过 0.8 cm；大鼠尾巴不超过 0.5 cm。

3、 裂解液、洗涤液 含有刺激性化学物质 ，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。

4、 洗涤液加入乙醇后要充分混匀，最好现用现配，每次根据所要提取的样本量计算后适量配制。