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文献和实验
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保存条件 :室温(10-30℃)保存,消化液请于-20℃存放;有效期1年
保质期 :1年
英文名 :Medi Blood RNA Isolate Kit
库存 :现货
供应商 :爱必信(上海)生物科技有限公司
CAS号 :-
规格 :80T/40T
产品描述 | |||||||||||||||||||||||||
描述 | 产品介绍: 该产品是专门用于中大量血液RNA的提取纯化,它是在综合比较了国外同类优质产品的基础上反复研制优化而成的。本试剂盒可从新鲜、冷冻或陈旧的血液中提取高质量的基因组RNA,也可以提取得到血液中感染的细菌或转移的肿瘤细胞RNA。血液中含有大量红细胞,这些红细胞对RNA提取造成很大干扰,百代生物经多次实验,研发成功了一种新型的红细胞裂解剂,它可以高效快速地裂解红细胞而不破坏有核细胞,使血液中的白细胞、循环肿瘤细胞、细菌等得以分离出来,使核酸提取的得率得以大幅提升。它采用了新的优质进口离子膜,提取得到的RNA产量更大,纯度更高,最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染,可以直接应用于Northern 杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、 cDNA 文库构建等。 产品特点: 1、操作简便快速,可在半小时内完成血液RNA提取; 2、提取RNA纯度高,无抑制剂,A260/A280为1.8-2.0; 3、产量高,提取量大,可在2mL 的血液中提取10μg以上RNA; 4、样本范围宽,可以是新鲜血,也可以是冻存血,可有效克服抗凝血中EDTA等对RT-PCR的抑制作用。 |
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使用方法 | 操作步骤:(请自备:无水乙醇、异丙醇、1.5mL灭菌RNase-free离心管、生理盐水) 1. 取出洗涤液,按终浓度70%比例加入无水乙醇,如 3mL加入7mL无水乙醇,9mL加入21mL无水乙醇,充分混匀; 2. 取1.5mL离心管1支,加入1mL已经解冻或新鲜的血液(冷藏血液需先轻振混匀后再加入),再加入70μL结合液,充分振荡15秒,室温放置5分钟,13,000rpm离心5分钟; 3. 彻底吸弃上清,加入0.8mL生理盐水,振荡至管底沉淀彻底分散,无结块,13,000rpm离心5分钟(注意将管盖、管壁粘附的血迹洗净); 4. 彻底吸弃上清,加入0.2mL生理盐水,振荡至管底沉淀彻底分散,无结块,再加入200μL裂解液、20μL消化液,振荡混匀,65℃水浴10 分钟; 5. 取出离心管,放置到室温,3,000rpm离心30秒,加入0.25mL异丙醇,充分振荡混匀; 6. 将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,13,000 rpm 离心1分钟,弃收集管内废液; 7. (可选步骤,去除DNA) 取RNase-free 离心管1只,每份需去除DNA的提取样本分别加入10x DNase I Buffer 6μL、RNase-free ddH2O 52μL 、RNase-free DNase I 2μL,轻轻手振混匀,勿剧烈震荡。用移液器在每份提取样本的吸附膜中央加入60μL上述配制好的DNase I反应液,室温放置15min,参见 RNase-free DNase I试剂盒。 8. 将吸附柱放回收集管内,加600μL 洗涤液至吸附柱内,静置2分钟,13,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液; 9. 将吸附柱放回收集管内,13,000 rpm 离心2 分钟,离去残留的洗涤液。同时,按每份样本40μL 取洗脱液(如10份提取样本,即取400μL 洗脱液),放置于灭菌1.5mL离心管,65℃预热。 10. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL 灭菌RNase-free离心管内,在吸附柱中心加入40 μL 预热洗脱液,静置2分钟,13,000 rpm 离心1分钟,收集RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步实验或-20℃保存。 |
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储存/保存方法 | 室温(10-30℃)保存,消化液请于-20℃存放;有效期1年 | ||||||||||||||||||||||||
技术指标 | 试剂盒组成:
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注意事项 | 注意: 1.裂解液、结合液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。洗涤液在使用前应加入乙醇后充分混匀,最好现用现配,每次根据所需提取的样本量计算后适量配制。 2. 该产品设定的标准提取血量为1mL,客户如改变提取血量,请同比例增减结合液、裂解液和消化液的使用量,洗涤液的量建议不低于500μL,洗脱液的量客户可根据对RNA浓度的要求进行选择,如要求RNA浓度较高,可使用较小体积的洗脱液,最低可使用20μL洗脱液。 3.由于RNA容易降解,提取实验所用器具应除去RNA酶,实验过程中最好戴一次性洁净手套、口罩,提取的RNA溶液为防止降解,可适当加入RNA保护因子(货号:abs60330,一般50μLRNA溶液加入2μL。) 本产品经严格的质量检验证明,无生物污染 |
爱必信(上海)生物科技有限公司
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