公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于临床应用及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)! 产品描述: 产品名称:RIPA裂解液(强) 描述: RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer),本意为 Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对组织和细胞都有较好的裂解作用。RIPA 的配方有很多种,根据其裂解强度的不同,大致可分为强、 中、弱三类,应用上会有一些差异。 本品为裂解性较强的 1×RIPA 裂解液,主要成分为 50mM Tris-HCl (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% 脱氧胆酸钠,0.1% SDS,以及正钒酸钠,,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白 降解,经本品裂解所得的蛋白样品,适用于蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫沉淀(IP),和免疫共沉淀(Co-IP)等实验。经本品裂解收集的蛋白样品,可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的去垢剂,不适合用 Bradford 法来测定总蛋白浓度。 产品组分:
组分 |
名称 |
规格 |
A |
ARIPA Lysis Buffer (Strong) |
100ml |
B |
PMSF(100mM) |
1.5ml |
外观: 溶液
使用方法: 一、培养的细胞样品 1、充分融解RIPA裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入PMSF(分子量:174.2 g/mol),使其最终浓度为1mM。 2、贴壁细胞:吸除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可忽略此步)。按照六孔板的每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加量。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。 悬浮细胞:离心收集细胞,用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。 3、充分裂解后,10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀等实验。 【裂解液用量说明】:通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。
二、组织样本 1、将组织剪切成细小的碎片,使用匀浆仪进行匀浆。 2、充分融解RIPA裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入PMSF(分子量:174.2 g/mol),使其最终浓度为1mM。 3、按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加量。【注意:如果裂解不充分可以适当添加用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可适当降低用量。】 4、充分裂解后,10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀等实验。 5、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分,之后使用相同步骤操作。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。 【注意】:RIPA裂解液的裂解产物经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散这些透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。像检测一些常见的转录因子,例如NF-kB、p53,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。 注意事项: 1、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 2、RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为 含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下,可 以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过 超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。 3、不同的细胞需要加入的裂解液的量可能会不同,需要根据具体条件进行条件筛选; 4、若裂解液产生沉淀或者析出,可在 37℃水浴中孵育,振荡使沉淀或析出物溶解,若不能 溶解,可适当加热助溶。 5、为了您的自身安全,使用试剂前,请做好防护,如穿实验服,带手套等。 储存/保存方法: -20℃保存,有效期12个月 absin,您身边的科研百宝箱 专业提供试剂、耗材、仪器,在线订购,7*24h全国发货,方便快捷! |