CD3/CD28抗体偶联磁珠；Anti-Human CD3/CD28 Monoclonal Antibody Beads

抗体名 ：-

抗体英文名 ：CD3/CD28抗体偶联磁珠

靶点 ：-

浓度 ：-

应用范围 ：-

宿主 ：-

适应物种 ：-

保质期 ：24个月

抗原来源 ：-

目录编号 ：-

级别 ：-

库存 ：现货

供应商 ：爱必信(上海)生物科技有限公司

标记物 ：-

克隆性 ：-

保存条件 ：2-8℃，有效期24个月。

形态 ：液态

亚型 ：-

免疫原 ：-

规格 ：1ml

产品描述
描述	CD3/CD28 磁珠 主要用于人T细胞的分离、活化和体外扩增。使用4.5um的超顺磁珠，与细胞大小相匹配，同时偶联抗CD3和CD28抗体，可以提供T细胞激活与扩增所需的主要信号和协同刺激信号。 首先，利用 CD3/CD28免疫磁珠进行磁性细胞分离，CD3+ T细胞便可从所得分离产物中分离并富集。分离后，CD3+ T细胞在磁珠的存在下培养。通过结合免疫磁珠上的抗CD3和抗CD28抗体，磁珠可以提供T细胞活化和扩增所需的初级和共刺激信号。被激活的T细胞产生IL-2（白介素2）、 GM-CSF（粒细胞巨噬细胞刺激因子）、IFN-γ（干扰素γ） 和 TNF-α（肿瘤坏死因子α），发挥T细胞的作用和功能。 仅需9-14天即可获得扩增100-1000倍的T细胞；
纯度	98%
浓度	2 ×108beads/ml
使用方法	1、CD3/CD28 磁珠的清洗： （1）在离心管里重悬磁珠（涡旋超过30s，或者颠倒混匀5min）。 （2）将确定体积的磁珠转移到离心管中。 （3）加入等体积的PBS缓冲液含1%的HSA，或者至少1ml的体积，进行重悬。 （4）把离心管放在磁力架（磁珠专用）上 1min，随后弃去上清。 （5）将离心管从磁力架（磁珠专用）上转移下来，用相同体积的 PBS 缓冲液含 1%的 HSA 重悬磁珠（第二步 最初体积的磁珠）。 2、磁珠分离和扩增 CD3 +的 T 细胞注意： 由于单核细胞在 37℃能够快速的吞噬磁珠，因此就降低了所能够接触到 T 细胞磁珠的绝对数量，进 而降低了 T 细胞活化和扩增的能力。 （1）通过流式或者是其他的方法确定样本中 CD3 +T 细胞的比例。 （2）对于 Ficoll 分离的 PBMC，将细胞轻柔的重悬于含 1%HSA 的 PBS 缓冲液中，并调节细胞密度为 2-5× 107个/mL，此处注意，总的细胞数量不要超过 2×108个。 （3）将磁珠和细胞比例为 3:1，加入已经洗过的 CD3/CD28 磁珠。 注意：如果需要活化的细胞是纯 T 细胞,那么磁珠和细胞的比例调整为 1：1 （4）将样品置于 1 转的摇床上，在 4℃-25℃条件下孵育 30min，在每次的试验中需要在 4℃-25℃范围内优 化最适的孵育温度。 （5）用无血清培养基或者含 1%HSA 的 PBS 缓冲液稀释磁珠和细胞的混合物，来保证磁力架（磁珠专用）的 分选体积。同时将离心管放在磁力架（磁珠专用）上 1-2min。 （6）弃上清，用抗 CD3 的染色抗体进行流式检测以便进行筛选效率的计算。 （7）将含有 1000IU/mL IL-2 的完全培养基重悬磁珠和细胞的混合物，并调整细胞密度为 0.5×106个/mL-1 ×106个/mL。 （8）将细胞悬液置于 6 孔板中，确保每孔细胞为 2.5×106-5×10 6个，且每孔的培养体积为 5mL,随后将 6 孔 板置于 37℃,5%CO2 的培养箱中，培养 7 天。 注意：每孔的培养体积可以根据情况进行调整，但是最重要的是培养体积的深度不要超过 1.2cm，否则由于细胞的通气量不够，而造成细胞的扩增和活率而受到影响。 3、细胞计数和培养体系的扩增： 注意：培养的初始 3 天，需要每天都进行细胞计数。同时通过流式细胞术对 T 细胞的纯度、表型、活化状 态进行追踪（如，培养的第 3,5,8 天及其培养的最后一天）。同时，收集培养上清进一步得对 T 细胞活化 状态进行细胞因子分泌的检测。 （1）定期轻轻的吹打每孔中的细胞悬液，以便将磁珠和细胞分离。吹打过程要确保能够分散所有可见的磁 珠与细胞的混合物。 （2）取 50ul 样品与 50ul 台盼蓝混合（计数之前不要去除磁珠）。 （3）显微镜下进行细胞活率和数量的统计。 （4）当 CD3+T＞1×106个/mL ,补加含有 IL-2 的 T 细胞完全培养基稀释细胞，调整细胞密度降低大约为 0.5 ×105个/mL。 （5）在培养的最后几天（9-14 天），进行细胞计数，并用磁铁去除磁珠。
储存/保存方法	2-8℃，有效期24个月。
基本信息
别名	human CD3抗体, CD28 beads抗体;CD3/CD28抗体偶联磁珠
外观	白色粉末
生物活性
靶点	GNRH Receptor